胰腺癌是恶性程度较高的消化道肿瘤之一,由于早期诊断困难,大多数病人诊断为胰腺癌时已处于晚期且已发生转移,5年生存率<5%,预后极差。目前,胰腺癌发生发展的机制还不清楚,在一定程度上限制了胰腺癌在治疗领域的发展。因此,研究胰腺癌发生发展的分子机制迫在眉睫,从而有助于发现胰腺癌的早期诊断、靶向治疗及预后评估的新途径。长链非编码RNA(long non-coding RNA,lnc RNA)是一类转录长度大于200nt的RNA,其不具备蛋白质编码功能。近年来研究发现,lnc RNA参与了表观遗传、染色质修饰、转录调控等多种重要的调控过程。因此,lnc RNA在疾病的发生和发展过程中具有重要的生物学功能,尤其影响肿瘤细胞的增长、凋亡及转移能力。变异性浆细胞瘤异位1(plasmacytoma variant translocation 1,PVT1)是一种特异性lnc RNA。近年来研究表明,PVT1作为肿瘤特异性基因在前列腺癌,肺癌,肝癌,胃癌,结直肠癌等多种肿瘤中发挥重要作用,参与肿瘤细胞增殖、凋亡、侵袭转移、干细胞分化及耐药等生物学功能。然而PVT1在胰腺癌中的分子机制还未被阐明。第一部分长链非编码RNA PVT1在胰腺癌组织及胰腺癌细胞中的表达差异目的:探讨长链非编码RNA PVT1在胰腺癌组织及胰腺癌细胞中的表达差异,为后续实验奠定基础。方法:1.通过荧光定量PCR技术检测9对胰腺癌患者癌组织及癌旁组织中PVT1的表达水平;2.通过荧光定量PCR技术检测SW1990、Pa Tu8988、Bx PC-3及Panc-1四种胰腺癌细胞系中PVT1的表达水平。结果:1.在9对胰腺癌患者癌组织及癌旁组织中,PVT1在癌组织的表达均大于癌旁组织;2.在四种胰腺癌细胞系中,PVT1在Pa Tu8988中的表达量最高,Bx PC-3次之,SW1990的表达量最低。结论:PVT1在胰腺癌组织中异常表达,提示PVT1在胰腺癌中发挥着作用;通过检测PVT1在四种胰腺癌细胞系中的表达,发现PVT1表达与胰腺癌细胞的恶性程度呈正相关,但其功能还需进一步研究验证。第二部分长链非编码RNA PVT1在胰腺癌细胞中生物学功能的研究目的:探讨PVT1在胰腺癌细胞中的生物学功能中的作用。方法:采用PVT1小干扰技术,下调Pa Tu8988和Bx PC-3细胞系PVT1表达;构建过表达质粒,筛选稳转株上调SW1990细胞的PVT1表达;通过细胞增殖实验、流式细胞术、黏附实验及Transwell实验分别检测细胞的增殖、凋亡、黏附及侵袭转移能力。结果:细胞增殖实验、细胞黏附实验、Transwell实验显示下调PVT1表达显著降低Pa Tu8988和Bx PC-3细胞的增殖、黏附及侵袭转移能力,上调PVT1表达显著提高SW1990细胞的增殖、黏附及侵袭转移能力;流式细胞术结果显示下调PVT1表达显著促进Pa Tu8988和Bx PC-3细胞的凋亡能力,上调PVT1表达明显抑制SW1990细胞的凋亡能力。结论:PVT1作为胰腺癌的致癌基因,能够增强胰腺癌细胞的增殖、黏附及侵袭转移能力,并抑制胰腺癌细胞的调亡;但PVT1在胰腺癌中的分子机制还需进一步研究。第三部分长链非编码RNA PVT1在胰腺癌细胞中分子机制的研究目的:探讨PVT1在胰腺癌细胞中的分子机制方法:1.Western Blot检测基质金属蛋白酶MMP2、MMP9表达;2.Western Blot检测凋亡相关蛋白:Caspase3、Bax、Bcl-2表达;3.Western Blot检测上皮间质转化相关蛋白:E-cadherin、N-cadherin、Vimentin、β-catenin、Snail、Slug表达;4.Western Blot检测TGFβ/smad信号通路相关蛋白:smad2/3、p-smad2/3、smad4、TGFβ1表达。结果:1.下调PVT1表达显著降低胰腺癌细胞MMP2、MMP9的蛋白表达水平,而上调PVT1表达却显著提高;2.下调PVT1表达显著降低胰腺癌细胞Bcl-2和Caspase3的蛋白表达水平,Bax蛋白表达升高;而上调PVT1则反之;3.下调PVT1表达显著降低胰腺癌细胞N-cadherin、Vimentin、β-catenin、Snail、Slug的蛋白表达水平,E-cadherin蛋白表达升高;而上调PVT1则反之;4.下调PVT1表达显著降低胰腺癌细胞p-smad2/3、TGFβ1的蛋白表达水平,smad4蛋白表达升高;而上调PVT1则反之。结论:PVT1作为肿瘤基因,通过TGFβ/smad信号通路促进胰腺癌细胞的侵袭转移,调控胰腺癌细胞的上皮间质转化进程。