【摘 要】
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大量研究表明RNA结合蛋白在生殖细胞发生过程中扮演者重要角色,它通过调控RNA的各种活动,在转录和转录后水平影响基因表达。果蝇how基因编码产物为RNA结合蛋白,现在有许多研究结果表明该蛋白参与果蝇体内多种活动进程,如肌肉细胞的迁移、类固醇代谢、心率控制、性别决定以及中胚层分裂等等。本文主要研究held out wings(how)基因在生殖细胞中的功能,以及LC结构域对HOW蛋白聚集的影响。首先
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大量研究表明RNA结合蛋白在生殖细胞发生过程中扮演者重要角色,它通过调控RNA的各种活动,在转录和转录后水平影响基因表达。果蝇how基因编码产物为RNA结合蛋白,现在有许多研究结果表明该蛋白参与果蝇体内多种活动进程,如肌肉细胞的迁移、类固醇代谢、心率控制、性别决定以及中胚层分裂等等。本文主要研究held out wings(how)基因在生殖细胞中的功能,以及LC结构域对HOW蛋白聚集的影响。首先,我们通过原核纯化HOW蛋白免疫小鼠,获得了 HOW蛋白鼠源抗体并通过Western Blot和免疫荧光染色分析了 HOW蛋白的表达情况。然后我们制备了 how基因敲低的转基因果蝇,发现在其生殖细胞中特异性敲低how基因后,果蝇生殖干细胞丢失,并且随着果蝇发育最终引起生殖细胞的全部丢失。接下来,我们研究了 LC结构域对HOW蛋白的影响,我们发现LC结构域不影响HOW蛋白在细胞中的定位。进一步的通过半变性凝胶电泳试验,我们发现HOW蛋白的LC结构域(QA-Rich)在很大程度上影响了该蛋白在体外的聚集,但是这种聚集与蛋白质之间二硫键的形成没有太大关系。在体外进行的蛋白质相变试验表明LC结构域缺失后HOW蛋白无法在体外形成规则的液滴状颗粒,从而进一步验证了 LC结构域对HOW蛋白的聚集有一定的影响。
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