人脐带间充质干细胞的生物学特性及神经分化研究

来源 :汕头大学 | 被引量 : 9次 | 上传用户:siyu321
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目的:研究人脐带间充质干细胞(MSCs)的生物学特性及丹参等药物诱导MSCs向神经细胞分化的可能性,为神经细胞移植、脐带组织库的建立及中药丹参作为神经诱导剂提供理论依据。方法:从人脐带华尔通胶(Wharton’s jelly)分离培养MSCs,培养、检测人脐带来源的MSCs的细胞表面标记,评价其生物学特性;丹参和β—巯基已醇诱导人脐带来源的MSCs向神经细胞分化;用免疫细胞化学方法检测神经细胞相关蛋白标记的表达;用光镜、扫描电子显微镜监测丹参诱导后细胞形态改变;透射电子显微镜观察丹参诱导后细胞超微结构改变;用共聚焦显微镜分析丹参诱导前后细胞内DNA、RNA含量改变;用RT-PCR检测细胞神经相关基因pleiotrophin和神经干细胞的标记巢蛋白(nestin)的表达。结果:从人脐带华尔通胶分离、培养的贴壁细胞,体外生长形态类似于成纤维细胞,可以维持在未分化状态稳定增殖,体外增殖超过10代,细胞冻存一个月后复苏,生长特点与冻存前基本一致。用流式细胞仪检测,这类细胞表达MSCs的表面标记CD29、CD44、CD59、CD90、CD105,不表达造血细胞表面标记CD14、CD33、CD34、CD28、CD45、CD117.和与移植免疫排斥相关的表面标记CD80(B7-1)、CD86(B7-2)、CD40。丹参和β—巯基已醇均可诱导人脐带MSCs向神经样细胞分化,分化的细胞表达神经干细胞的标记巢蛋白(nestin),神经元的蛋白标记β-Ⅲ类神经微管(β-TubulinⅢ)和神经微丝(NF),以及神
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