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泛素化调节是细胞内重要的蛋白质翻译后修饰系统。研究发现其几乎参与了全部的细胞生命过程。去泛素化酶可以将泛素分子从目的蛋白上移除，从而改变目的蛋白的结构或功能。去泛素化酶USP家族是目前成员最多的一类去泛素化酶，包括USP1、USP3、USP12和USP28等很多成员，USP家族亦属于半胱氨酸蛋白水解酶类。UAF1(USP1-associated factor1)最初是作为免疫蛋白在细胞中发现的，其分子量约为80kDa，并且在进化中较为保守。USP1一方面通过调节FANCD2的泛素化情况进而参与范科尼贫血通路的调节，另一方面可以保持PCNA的去泛素化防止低保真DNA聚合酶的募集，以保证染色体DNA复制的准确性。体外酶活性研究发现人USP1的单体活性很低，当USP1与UAF1形成复合体以后，其酶活性可以增加35倍（Kcat/Km）。细胞内研究发现，USP1带有核定位信号，它可以将存在于细胞质中的UAF1富集到细胞核中。由此可以推断，UAF1在USP1发挥活性功能时有着重要的作用。鸡USP1（chUSP1）与人USP1同源性高达72%，经chUSP1与人USP1蛋白结构比对发现，chUSP1具有去泛素化酶活性所必须的半胱氨酸盒（Cys box）和组氨酸盒（His box），这一部分结构域严格保守。在USP类半胱氨酸-组氨酸-天冬氨酸催化三联体中，半胱氨酸的硫醇巯基在去泛素化反应的第一步会进攻底物的羟基，天冬氨酸使催化活性的组氨酸发生极化，有利于亲核反应的发生；组氨酸为质子供体，在整个酶促反应中起着至关重要的作用。在前期实验中，已经通过外源表达纯化得到了chUSP1单体、chUSP1/chUAF1复合体，并且在体外实验中证明其有水解K48、K63方式连接的泛素链活性。但是对其酶活性及特异性更深入的研究未见报道。在本研究中，首先使用野生型chUSP1/chUAF1复合体对其酶特异性分析，证明其可以水解K6、K11、K27、K33、K48和K63方式连接的泛素链，没有水解K29方式连接的泛素链以及类泛素蛋白FAT10、ISG15、Ufm1的活性，具有微弱的水解类泛素蛋白NEDD8的活性。对已有的chUSP1基因进行定点突变，得到了chUSP1CGG91,680,681SAA/chUAF1、chUSP1HGG594,680,681AAA/chUAF1、 chUSP1HGG603,680,681AAA/chUAF1、chUSP1GGD680,681,758AAA/chUAF1、chUSP1CHGG91,594,680,681SAAA/chUAF1突变型蛋白。使用五种突变型复合体和野生型chUSP1GG680,681AA、chUSP1GG680,681AA/chUAF1进行酶活性检测，经计算得与chUSP1GG680,681AA/chUAF1相比，chUSP1CGG91,680,681SAA/chUAF1酶活性降低10倍，chUSP1GGD680,681,758AAA/chUAF1酶活性降低33倍， chUSP1HGG603,680,681AAA/chUAF1酶活性降低7倍，chUSP1HGG594,680,681AAA/chUAF1和chUSP1CHGG91,594,680,681SAAA/chUAF1完全丧失活性。在正在进行的chUSP1水解Ub-AMC的反应中加入chUAF1后，chUSP1水解Ub-AMC的活性得到显著提升，说明chUAF1与chUSP1相互作用是在瞬时发生的。本研究检测了chUSP1/chUAF1复合体的酶特异性，并检测、计算得到野生型单体、复合体和突变型复合体酶活性相关数据，并进一步分析chUAF1与chUSP1相互作用机理，为研究chUSP1在体内的功能、活性奠定了基础。