【摘 要】
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玉米种子真伪和纯度检验对玉米生产具有重要意义.基于玉米品种纯度及其真伪鉴定实践中送检方在提供杂交种子的同时均需提供父母本,以作为模板对照鉴别杂交种.但处于品种保护及商业秘密,送检方不愿或无法提供亲本种子,给检测工作带来很大的难度.同时在玉米杂交种选育及生产中,存在使用他人培育或拥有的自交系而却逃避使用义务,使培育者和产权拥有者难以维权保护.而玉米F代种子的种皮组织基因组和母本自交系基因组完全相同,
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玉米种子真伪和纯度检验对玉米生产具有重要意义.基于玉米品种纯度及其真伪鉴定实践中送检方在提供杂交种子的同时均需提供父母本,以作为模板对照鉴别杂交种.但处于品种保护及商业秘密,送检方不愿或无法提供亲本种子,给检测工作带来很大的难度.同时在玉米杂交种选育及生产中,存在使用他人培育或拥有的自交系而却逃避使用义务,使培育者和产权拥有者难以维权保护.而玉米F<,1>代种子的种皮组织基因组和母本自交系基因组完全相同,该研究就借助这一特点同时使用SSR标记技术,分离F<,1>种子种皮之后,初步建立一套以F<,1>代种子为实验材料经SSR引物扩增,获得父本、母本全套DNA指纹图谱的技术体系.内容包括:1、通过分析比较,确定快速、干净分离的碱溶法作为种皮分离方法.同时对种皮组织和种子胚DNA提取方法及PCR,进行优化及确定最佳反应体系筛选.2、从162对SSR引物中筛选出30对主带清晰带型稳定,重复性好的引物.30对引物在60个亲本自交系中共检测出119个等位基因,平均3.9个,每对引物可以检测到2-7个数目不等的等位基因;片段大小介于73bp-527bp之间;多态性信息量为0.24-0.82,平均为0.56.30对SSR引物PCR扩增玉米单交种京科9、京科2、农大108、京早13和唐抗5.得到每个单交种的多份双亲互补DNA指纹图谱及多个双亲互补型引物.3、借助双亲互补型引物,将杂交种及双亲和杂种种皮共扩增,获得种皮DNA指纹图谱.经Jaccard公式计算得出:种皮SSR-DNA指纹与母本SSR-DNA指纹相似系数为1,验证了两者基因组成相同.以种皮SSR-DNA指纹对人工掺杂亲本籽粒的SC704杂交种种子进行纯度准确验证,从94粒混合玉米籽粒中,准确检测出混入的5粒父本和4粒母本;以种皮SSR-DNA指纹为标准,在实践检验中以10份农大108大田种子进行纯度检测,检测纯度平均92％和田间种植鉴定纯度92.5％相近;认为以种皮DNA指纹为参照进行品种的纯度检测是准确可靠的.4、确定了以F<,1>种子种皮指纹图谱为参照标准对照,实施玉米种子纯度检测及进行亲本自交系真实性鉴定的技术操作标准.
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