冻凝胶整体柱的制备及固定化血管紧张素转化酶的研究

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血管紧张素转化酶(Angiotensin-converting enzyme,简称ACE)是肾素-血管紧张素系统的重要酶类,是高血压治疗的关键靶点之一。固定化酶是20世纪50年代发展起来的一项新技术,目前对固定化酶的研究主要集中在寻找性能良好的载体上,良好的载体可以明显提高固定化酶的酶解效率,使酶解过程更加稳定地进行。利用冻凝胶技术制备的整体柱载体具有较好的渗透性、较小的传质阻力、高容量、结构均匀、制备成本低。从成分复杂的中药体系中筛选ACEI一直是新药开发的热点研究领域。为此,本文对冻凝胶整体柱的制备及其固化血管紧张素转化酶筛选中药中ACEI进行了研究。本论文主要研究工作如下:1.发展了冻凝胶法制备壳聚糖整体柱。探讨了不同壳聚糖浓度、不同戊二醛量对壳聚糖冻凝胶整体柱的影响。通过扫描电镜观察到该整体柱材料具有良好孔径大小,具有良好的骨架密度、平均孔容量、孔隙率,含水量较低,该壳聚糖柱的流速与柱前压符合Hangen-poiseuille线性关系。2.冻凝胶法制备卵蛋白/壳聚糖交联整体柱载体,通过戊二醛交联将血管紧张素转化酶(ACE)键合固定后形成酶整体柱。文中优化了卵蛋白/壳聚糖整体柱载体制备条件、ACE固定化条件,并考察了酶整体柱的性质。结果表明该固定化ACE的pH范围更宽,并向酸性方向偏移,最适反应温度变宽,温度稳定性好,并且有很好的重复利用率和贮存稳定性。3.采用冻凝胶技术制备的卵蛋白/壳聚糖整体柱载体固定化ACE,以此为酶反应器,利用亲和色谱法,联用HPLC,通过实验组与对照组对应的各组分色谱峰的差异,实现从天然药物黄芩中快速筛选ACEI。
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