目的1.检测地塞米松(DXM)、干扰素α-2b(IFN-α2b)、丝裂霉素(MMC)、5氟尿嘧啶(5-FU)、环孢素A(CSA)、他克莫司(FK-506)这六种临床常用药物对体外培养人复发翼状胬肉成纤维细胞(RHPFs)的半数抑制浓度(IC50)。2.观察半数抑制浓度条件下地塞米松(DXM)、干扰素α-2b(IFN-α2b)、丝裂霉素(MMC)、5氟尿嘧啶(5-FU)、环孢素A(CSA)、他克莫司(FK-506)对体外培养的人复发翼状胬肉成纤维细胞的抑制作用。方法1.实验第一部分:于2015年5月至2016年7月收集在天津医科大学眼科医院行复发性翼状胬肉切除术的患者术中切除组织标本7例7眼,采用组织块培养法分离和常规培养成纤维细胞,采用免疫组织化学法对培养细胞进行鉴定;2.实验第二部分:加药48h后CCK-8比色法检测六种药物对RHPFs的生长抑制率,未添加药物的培养细胞作为对照组。分别计算其半数抑制浓度(half maximal inhibitory concentration,IC50);3.实验第三部分:流式细胞仪检测RHPFs在六种药物IC50作用48h后细胞凋亡和细胞周期的变化;免疫组化SP法检测RHPFs在六种药物IC50作用48h后增生细胞核抗原(PCNA)的表达变化。结果1.培养的细胞为长梭形,旋涡状排列,细胞中波形蛋白表达阳性,角蛋白无表达。2.CCK-8检测结果计算出DXM、IFNα-2b、MMC、5-FU、CSA、FK-506对RHPFs的IC50分别为3.5×103mg/L、6.1×102mg/L、3.2×10-1mg/L、2.2×101mg/L、6.3×101mg/L、6.0×101mg/L。3.(1)流式细胞仪结果显示RHPFs在六种药物IC50剂量下分别作用48h后,IFNα-2b组、Cs A组、MMC组、FK506组、DXM组和5-FU组凋亡细胞比例分别为(35.00±3.21)%、(30.37±1.67)%、(26.11±0.75)%、(22.01±0.07)%、(20.95±1.68)%和(19.85±0.52)%,与对照组的(11.38±2.18)%比较细胞凋亡比例均明显升高,诱导细胞凋亡能力由强到弱的药物依次为IFN、CSA、MMC、FK-506、DXM、5-FU,其中FK-506、DXM、5-FU之间的差异无统计学意义(p>0.05),剩余各组间均有统计学差异(p<0.05);(2)对照组G0/G1期、S期和G2/M期细胞比例分比为(85.64±2.62)%、(5.29±1.56)%和(2.73±2.66)%,各药物组G0/G1期细胞比例明显下降,S期和G2/M期细胞明显升高,总体比较差异均有统计学意义(均P<0.05),说明细胞周期阻滞在S期和G2/M期,对细胞整个周期阻滞效果由强到弱依次为MMC、CSA、5-FU、DXM、IFN、FK-506,其中CSA和5-FU、5-FU和DXM、IFN和FK-506之间差异无统计学意义(p>0.05),剩余各组之间差异均有统计学意义(p<0.05);(3)免疫组化SP法结果显示对照组、FK506组、DXM组、5-FU组、IFN-α2b组、Cs A组和MMC组细胞中PCNA的阳性表达率分别为(95.00±2.00)%、(82.67±5.04)%、(80.00±2.78)%、(64.00±6.55)%、(38.00±3.00)%,(32.00±4.36)%和(29.67±3.02)%,总体比较差异有统计学意义(F=25.995,P<0.01),各药物组细胞中PCNA阳性表达率均明显低于对照组,差异均有统计学意义(均P<0.05)。PCNA阳性表达率下降程度由强到弱依次为MMC、CSA、IFN、5-FU、DXM、FK-506,其中CSA、IFN、MMC组间差异无统计学意义(p>0.05),DXM、FK-506两组间差异无统计学意义(p>0.05),剩余各组间均有统计学差异(p<0.05)。结论DXM、IFN-α2b、MMC、5-FU、CSA、FK-506对复发翼状胬肉成纤维细胞的增殖均存在抑制作用,并且促进其凋亡,其中MMC和CSA促进细胞凋亡和抑制其增殖的作用最为显著。