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将田间采集的感病虫体在青岛农业大学昆虫生态实验室进行分离、鉴定和ITS序列分析;同时筛选对西花蓟马成虫具有高效致死作用的菌株,在扫描电镜下观察其在西花蓟马成虫体表的附着、萌发和侵染的过程;并将高毒力的白僵菌与低剂量的多杀菌素混合后喷施西花蓟马成虫,比较各处理的毒力差异性;同时,比较经相同浓度白僵菌处理的西花蓟马成虫和烟蓟马成虫的死亡率差异。主要结果如下:
1.白僵菌生物学特性研究
将室外采集的被虫生真菌侵染的草履蚧带回室内进行分离纯化,经形态学初步鉴定为球孢白僵菌(Beauveria bassiana),但各菌株的菌落形态、生长速率和产孢量存在一定差异,通过PCR扩增得到CYT4菌株的ITS序列,并建立系统进化树,确定CYT4菌株为球孢白僵菌(B.bassiana)。
采用37℃、38℃、39℃和40℃的高温分别处理CYT1、CYT4、CYT5、CYT8和CYT10菌株的孢子各1h、2h、3h、4h、5h,结果表明,37℃高温对孢子萌发几乎无影响,且萌发率略高于25℃的对照处理,其它高温处理时间越长,孢子萌发率越低。低温采用5℃和10℃处理10d,结果表明,相较于25℃,低温处理的孢子萌发率明显降低,但5℃和10处理之间,萌发率差异不显著。
2.白僵菌对西花蓟马的毒力及其在体表侵染的扫描电镜观察
用分离的13株白僵菌的1×108孢子·mL-1的孢悬液处理西花蓟马成虫,CYT12和CYT4菌株对西花蓟马成虫的死亡率最高分别为:81.48%和66.08%,CYT11菌株致死率最低,仅为17.83%,说明各菌株间毒力差异较为明显。在室内测定了白僵菌CYT4菌株的不同浓度对西花蓟马成虫和若虫的致死作用。结果表明球孢白僵菌的致死率随浓度的增加而增加,处理6d后,1×109、1×108、1×107和1×106孢子·mL-1的孢悬液对成虫的致死率分别为83.57%、66.08%、49.78%和20.22%,对二龄若虫的致死率分别为72.84%、42.49%、33.49%和10.04%,但均低于对成虫的致死率。
用1×108孢子·mL-1白僵菌处理西花蓟马成虫后,扫描电镜下观察球孢白僵菌孢子在成虫体表的附着情况,结果如下:在触角基节、复眼、足部褶皱区、刚毛窝、翅、产卵器和各体节连接处均有大量的分生孢子附着和萌发,但腹部的分生孢子量很少,尤其在节间膜处几乎无分生孢子;分生孢子在1h时即附着在体表,12h时已萌发,36h时有穿透体壁现象,48h以后整个虫体被菌丝包被。
3.白僵菌与低剂量多杀菌素混合对西花蓟马成虫的毒力
0.03、0.04、0.05、0.06μL·mL-1的多杀菌素与1×108孢子·mL-1的球孢白僵菌混合后,孢子萌发率均在90%以上,初步证明多杀菌素对白僵菌孢子萌发无影响。1×108孢子·mL-1白僵菌悬浮液与低剂量多杀菌素混合对西花蓟马成虫的致死作用结果显示:在RH90%的条件下,0.04和0.06μL·mL-1的多杀菌素与1×108孢子·mL-1的球孢白僵菌混合后,对西花蓟马的致死率达到89.42%和95.76%;改变湿度条件时,在RH90%处理8h的死亡率≈RH90%处理24h>RH40%处理。
4.白僵菌对烟蓟马的毒力
在相对湿度90%条件下处理24h,1×108孢子·mL-1白僵菌对烟蓟马成虫致死率的三次重复分别为50.73%、65.82%和77.08%,均低于对西花蓟马成虫的致死率70.95%、71.33%和77.75%,但各处理间差异不显著。均高于完全在相对湿度40%条件下处理的死亡率(30.73%和29.85%),且不同湿度处理间死亡率差异显著。