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目的: 作为核小体重塑因子(NURF)复合物的核心亚基,BPTF在染色质重塑中起重要作用。近年来,其在肿瘤发展中的作用日益受到重视。然而,其在肝癌发展中的精确功能和分子机制尚不清楚。展示了BPTF在肝癌进展中的促肿瘤作用,发现相比于正常肝细胞和组织,BPTF在肝癌细胞和组织中高度表达。其沉默导致肝癌细胞的增殖能力,克隆形成能力和干细胞特性的抑制。此外,BPTF敲低有效地增敏了化疗药物的抗肿瘤作用,并导致在肝癌细胞中诱导了更多的凋亡。一致的是,在异种移植的人类肝癌细胞中沉默BPTF降低了肿瘤增殖和转移并且伴随着癌症干细胞(CSC)相关蛋白marker的下调。值得注意的是,我们的研究通过转录调控hTERT表达提供了对BPTF在肝癌中肿瘤促进作用机理的认识,从而提高了hTERT介导的肝癌细胞的存活和干细胞维持。高表达BPTF的肝癌患者也显示出高的hTERT表达水平,高表达的BPTF或hTERT表达水平与肝癌患者晚期恶性程度和低生存率呈正相关。总之,我们的研究结果表明了BPTF在肝癌进展中的肿瘤发生功能,并且也提示了新型BPTF-hTERT轴在肝癌中具有潜在的治疗和预后的显著性。 方法: 1.使用蛋白质印迹分析,研究了BPTF在肝癌细胞和肝癌患者组织中的表达情况;利用公共数据库Oncomine,研究了BPTF在肝组织和肝癌组织中mRNA水平的表达;通过TCGA数据库,研究了BPTF在肝组织和肝癌组织中DNA拷贝数的变化。 2.BPTF敲低后,通过MTT,克隆形成实验检测BPTF对细胞增殖能力的影响;通过划痕实验,Transwell实验检测BPTF对细胞迁移侵袭能力的影响。 3.沉默BPTF,通过肿瘤球形成实验,流式检测干性marker CD24、CD44以及Western blot实验检测BPTF对肝癌细胞干性的影响。 4.敲低BPTF,检测抗肿瘤药物DDP和5-Fu的IC50值,通过AOEB实验,流式细胞术,Western blot实验检测BPTF敲低后增加了肝癌细胞对化疗药物的敏感性。 5.通过敲低BPTF,检测BPTF对hTERT启动子荧光素酶报告基因活性的影响;通过染色质免疫共沉淀实验,检测BPTF与hTERT的相互作用;通过敲低BPTF,过表达hTERT,进行克隆形成实验,肿瘤形成实验,Western blot实验检测BPTF是否能够通过介导hTERT来影响肝癌的增殖以及干性特征。 6.动物实验,通过构建稳转细胞系,将稳转细胞进行皮下注射,观察小鼠皮下移植瘤形成情况;将稳转细胞系通过裸鼠尾静脉注射,观察肝癌细胞的肺转移能力。 7.通过肝癌组织芯片对81肝癌例患者的组织进行分析,研究BPTF的表达TNM分期的关系;BPTF、hTERT的表达对肝癌病人生存率的影响。 结果: 1.相比于肝组织,BPTF在肝癌组织中蛋白表达水平高;通过数据库的研究发现,BPTF在肝癌组织中的mRNA的表达水平和DNA拷贝数要高于肝组织。 2.研究发现,BPTF的敲低减弱了肝癌细胞的增殖能力,迁移侵袭能力,干性特征以及增加了对化疗药物的敏感性。 3.BPTF与hTERT特定启动子区域结合并与hTERT相互作用,通过调控癌症干细胞(CSC)相关蛋白表达来促进肝癌细胞的增殖能力和维持干性特征。 4.BPTF的沉默降低了异种移植瘤的生长和肺转移的能力,并伴随着癌症干细胞(CSC)相关蛋白marker在异种移植瘤和肺转移灶表达水平的下降。 5.组织芯片分析结果显示,BPTF的表达与TNM分期相关;Kaplan-Meier生存曲线显示,BPTF和hTERT的高表达水平预示着肝癌患者的不良预后。 6.通过对临床样本的分析,BPTF与hTERT在蛋白表达水平上有极大地相关性。 结论: 我们的数据为BPTF通过转录激活hTERT表达驱动肝癌的进展提供了功能性和机制方面的证据,包括促进肿瘤细胞增殖,维持干细胞特性,增加肿瘤转移,。我们的数据还证明了BPTF在调节肝癌细胞对化疗药物的敏感性中的贡献,如敲低BPTF增加了肝癌细胞对DDP和5-FU的敏感性以及细胞的凋亡。所有结果表明,BPTF的激活可能作为一个生物标志物来推动肿瘤进展,预测不良预后,并作为肝癌患者的有希望的治疗靶标。