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枣(Ziziphus jujuba Mill.),鼠李科(Rhamnaceae),枣属(Ziziphus Mill.),是我国主要的经济林树种和果树树种。枣树常常会受到枣疯病植原体的侵染,引起枝丛生、叶片黄化、节间变短等症状,对枣树的生产具有毁灭性。相关研究表明,AP2/ERF转录因子种类繁多、功能多样,可调控植物的生长发育、激素代谢等途径,也参与非生物胁迫和生物胁迫的调控。为了研究AP2/ERF可能在枣疯病发病过程中的作用,利用生物信息学分析的方法鉴定出枣中的AP2/ERF转录因子家族,通过对AP2/ERF转录因子在枣疯病感病过程中的表达量分析,筛选出在枣疯病发病过程中可能发挥作用的基因,通过农杆菌介导转化’K326’烟草叶片和’蜂蜜罐’枣不同外植体(根、下胚轴、叶片、子叶)进行基因功能验证。主要结果如下:1、通过植物转录因子数据库和NCBI数据库,在枣中共鉴定出145个AP2/ERF转录因子,其中ERF、AP2、RAV亚家族分别包含116、23、5个成员,且有1个转录因子独立一组;对其进行染色体定位,发现在枣的12条染色体上各有分布;构建枣和拟南芥的ERF蛋白序列的系统进化树,将枣ERF亚家族分为12个亚组,分别为Group Ⅰ-X、Group Ⅵ-L、GroupXb-L,除了 GroupXb-L亚组,其余每组中均含有不等数量的基因;对枣AP2/ERF蛋白进行基序分析,发现AP2亚家族中含有的保守基序最多,其次为ERF亚家族,RAV亚家族含有的保守基序最少。2、将含有饱满芽的感枣疯病灰枣枝和健康灰枣枝分别嫁接到健康灰枣砧木上,根据植原体侵染过程的关键时期和引起的相关症状,提取枣叶片中的RNA并进行转录组分析(RNA-Seq),得到73个差异表达基因(DEGs),从中挑选10个表达量上调的基因(ZjERF1、ZjERF46、ZjERF18、ZjERF102、ZjERF36、ZjERF49、ZjEF91、ZjERF38、ZjERF85、ZjERF88);再次采取感病枣枝和健康枣枝并通过’皮接法’嫁接到健康砧木上,通过对挑选的10个基因在枣疯病发生过程中的时空表达分析,发现植原体侵染过程中引起了ZjERF1、ZjERF36、ZjERF38、ZjERF49、ZjERF85、ZjERF102基因在韧皮部中的表达上调,其中ZjERF1,ZjERF85表达最显著,同时引起了 ZjERF88在叶片中的表达上调。3、通过农杆菌介导的方法对ZjERF1、ZjERF85、ZjERF88过表达载体转化烟草进行基因功能验证,发现烟草叶片外植体在筛选培养10天左右分化形成愈伤,25天左右成芽,40天左右芽长大约为4-5 cm,60天左右长成植株。通过PCR检测对转基因烟草进行分子鉴定,共获得95个阳性植株,其中ZjERF1转基因植株18棵,ZjERF85转基因植株64棵,ZjERF88转基因植株13棵。4、通过农杆菌介导的方法对过表达ZjERF85载体转化’蜂蜜罐’枣不同外植体(包括下胚轴、根、子叶、叶片)进行基因功能验证,发现根和下胚轴较子叶、叶片的长势快且健壮。其中根和下胚轴在筛选培养基中生长15天左右出芽,25天左右可成株:而叶片在10天左右分化形成愈伤,30天左右才出芽,60天左右才可成株;子叶在15天左右形成愈伤,25天左右出芽,50天左右小芽长高。通过PCR检测对转基因植株进行分子鉴定,获得ZjERF85转基因阳性芽22个,完整植株13个。