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研究目的本论文研究并开发了使用UPC2-MS/MS系统建立测定血浆中双环醇含量的方法。UPC2作为以Supercritical Fluid Chromatograghy超临界流体为基础的超高效合相色谱开发双环醇人体血浆样品的定量新方法。本论文分别研究了饮食与不同的给药剂量对双环醇片在人体内的药代动力学行为的影响,本研究基于采用了多重反应离子扫描模式(MRM)的LC-MS/MS技术,建立了适用于检测人血浆中双环醇的分析方法,将此方法用于测定人血浆中双环醇的血药浓度,计算双环醇相应的药物代谢动力学参数,并对药物代谢动力学参数进行比较分析,为双环醇在中国人体内临床研究提供科学依据。研究方案建立了 UPC2-MS/MS系统测定血浆中双环醇含量的分析方法。人体生物样品加入IS溶液并用有机试剂沉淀蛋白后,将蛋白杂质去除后取3μL上清液进样,进入UPC 2-HSS C18 SB柱(3.0×50mm,1.8um)色谱柱经过梯度洗脱方式进行分离,改性剂为甲醇-乙腈、含有0.2%甲酸的甲醇作为补偿,流速为:0.2mL/min,UPC2-MS/MS系统总用时为4.0 min,MS/MS采用ESI源库伦爆炸原理,用于质谱定量的离子对分别为:双环醇(373.13.1/314.03,m/z),联苯双酯(419.12/386.98,m/z)正离子扫描多重反应监测(MRM)模式。本UPC2-MS/MS方法按照国家食品药品监督管理局(China Food and DrugAdministration,CFDA)指导原则要求,分别从线性范围、最低定量下限LLOQ、专属性SPE、精密度、准确度等方面进行完全方法确证。建立了适用于检测人血浆中双环醇的LC-MS/MS分析方法。人体生物样品用有机试剂沉淀后,去除蛋白杂质后取20μL上清液,进入AgilentzorbaxSB C18(4.6×150mmI.D.,5μm)色谱柱,经过不同的阶梯度的有机相和水相的配比洗脱的方式进行液相色谱的分离,流动相B为乙腈溶液含有1%甲酸、流动相A为水相含有1%甲酸和2 mM乙酸铵,LC-MS/MS系统总用时为6.0 min。MS/MS系统采用ESI-电喷雾离子源,正离子多重反应监测(MRM)模式扫描,用于定量的离子对分别为:双环醇(408.1/341.0,m/z),联苯双酯(436.0/386.9,m/z)。本LC-MS/MS方法按照国家食品药品监督管理局(China Food and Drug Administration,CFDA)指导原则要求,分别从线性范围、最低定量下限LLOQ、专属性SPE、精密度、准确度、提取回收率RE、基质效应ME和样品稳定性等方面进行完全方法确证。利用所建立的LC-MS/MS定量分析方法分别测定了人血浆中双环醇的浓度,并且绘制了双环醇的药物浓度-时间曲线。根据双环醇的药物浓度-时间曲线求出双环醇药代动力学参数(达峰浓度Cmax、达峰时间Tmax、消除半衰期t1/2、药-时曲线下面积AUC0-∞等),并对上述药物代谢动力学参数进行相关分析,用于双环醇药物代谢动力学过程进行相关评价。研究结果建立了 UPC2-MS/MS系统测定血浆中双环醇含量分析方法。同普通高效液相系统相比分析时间更短(4min),灵敏度更高,更加环保,更加节省溶剂。本方法符合CFDA指导原则要求,能够满足双环醇临床药物代谢动力学研究的要求,可用于双环醇药物代谢动力学相关研究。本研究建立了基于多重反应监测(MRM)模式检测人血浆双环醇的LC-MS/MS分析方法,该方法优点如下:分析时间更短,待测物双环醇和内标联苯双酯的检测不会受到内源性物质的干扰;双环醇和内标联苯双酯在分析批内和批间的准确度和精密度均满足分析测试要求;样品处理方法表现出了平行且较高的提取回收率;双环醇和内标联苯双酯的检测基本不受基质效应的影响;进行了双环醇稳定性试验的考察,可保证生物样品在储存、运输、分析的过程中均保持样品的稳定性。本方法符合CFDA指导原则要求,能够满足对双环醇临床药物代谢动力学研究的要求,可用于双环醇药物代谢动力学的相关研究。