5-氟尿嘧啶和顺铂缓释剂对横纹肌肉瘤RD细胞作用的研究

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目的:将根据控释给药理论研制的5-氟尿嘧啶(5-Fu)和顺铂两种缓释剂进行体外释放实验及体外抑瘤实验,观察药物在体外的释放情况及对人横纹肌肉瘤RD细胞的抑制作用及其对细胞周期的影响,为缓释剂对眼眶横纹肌肉瘤作用的研究奠定基础。方法:1.5-Fu和顺铂缓释剂的体外释放实验:取含5mg 5-Fu的缓释剂置于10ml刻度试管中,加入5ml 0.1mol/LPBS,37℃恒温下浸泡,按浸泡后第1d,3d,5d,8d留取浸出液标本,用高效液相色谱仪测定药物浓度,计算药物的释放量。顺铂缓释剂体外缓释方法同5-Fu(由于方法相同及经费考虑,顺铂缓释剂仅体外缓释留取浸出液标本,不再测定药物浓度)。2.横纹肌肉瘤RD细胞的复苏及培养,观察细胞形态,了解生长情况和特性,并观察其与眼眶原发横纹肌肉瘤在形态学上的异同。3.5-Fu和顺铂缓释剂的体外抑瘤实验:将5-Fu缓释剂浸泡后第1d,3d,5d,8d的浸出液标本,分别作用于横纹肌肉瘤RD细胞,并在作用24小时后观察横纹肌肉瘤RD细胞的形态变化,应用MTT比色法检测各浸出液标本对横纹肌肉瘤RD细胞增殖的抑制作用。顺铂缓释剂方法同5-Fu缓释剂。4.应用流式细胞仪,分析不同浓度5-Fu和顺铂浸出液对横纹肌肉瘤RD细胞细胞周期的影响。结果:1.5-Fu的体外释放实验:第1、3、5、8d 5-Fu缓释剂在PBS中释放5-Fu的浓度分别为138.84μg/ml、42.08μg/ml、27.15μg/ml和22.33μg/ml。即第1、3、5、8d释放量分别为649.20μg、210.40μg、135.75μg、111.65μg,释放时间达8d以上。2.复苏的横纹肌肉瘤RD细胞生长良好,传代稳定,细胞多呈梭形或蝌蚪形。与眼眶原发横纹肌肉瘤在形态学上基本一致。3.5-Fu和顺铂缓释剂的体外抑瘤实验:5-Fu缓释剂第1、3、5、8d的浸出液对横纹肌肉瘤RD细胞的抑制率分别为57.6%、49.6%、44.8%、34.5%;顺铂缓释剂第1、3、5、8d的浸出液对横纹肌肉瘤RD细胞的抑制率分别为87.8%、46.4%、42.5%、31.1%。,MTT法所测5-Fu和顺铂缓释剂的OD值均低于正常对照组,差异具有统计学意义(P<0.05)。空白缓释剂对横纹肌肉瘤RD细胞无明显抑制作用,与对照组相比,差异无统计学意义(P>0.05)。4.流式细胞仪检测结果显示,两种缓释剂作用后的横纹肌肉瘤RD细胞主要表现为G1期阻滞,S,G2期细胞减少,PI%与对照组相比差异有显著性(P<0.05)。结论:1.5-Fu和顺铂缓释剂能在8d内在体外先突释、后缓释,较稳定地持续释放,并对人横纹肌肉瘤RD细胞有持续地抑制作用,干扰了RD细胞的细胞周期,产生G1期阻滞,从而抑制细胞增殖。5-Fu对RD细胞的抑制作用具有剂量依赖性。2.根据本实验的结果,推断5-Fu和顺铂缓释剂同样可对眼眶原发横纹肌肉瘤细胞有持续地抑制作用,为后续研究提供实验基础及理论依据。
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