【摘 要】
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筛选出两种混合型抗冻剂配方:5＃,过滤灭菌海水中添加14％的二甲亚砜、6％的葡萄糖、4％的1,2-丙二醇保存2~4细胞期的胚胎;7＃,过滤灭菌海水中添加8％的二甲亚砜、4％的葡萄糖、2％的1,2-丙二
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筛选出两种混合型抗冻剂配方:5＃,过滤灭菌海水中添加14％的二甲亚砜、6％的葡萄糖、4％的1,2-丙二醇保存2~4细胞期的胚胎;7＃,过滤灭菌海水中添加8％的二甲亚砜、4％的葡萄糖、2％的1,2-丙二醇保存担轮幼虫;抗冻剂分三步添加,冷冻体积均为0.4ml,在-20℃平衡10min,-80℃平衡5min,然后进入液氮罐中逐级降温,距离液氮表面25cm、15cm、5cm各停留5分钟,保存一段时间后,在距离液氮面5cm、15cm、25cm处每级停留6分钟,进入35℃水浴解冻,解冻后逐步去除抗冻剂,胚胎和幼虫的成活率基本上可以稳定在35％和25％左右.筛选出1＃、3＃、9＃、10＃、16＃玻璃化液配方,将2~4期胚胎移入到4℃冰箱中预冷好的玻璃化液中,冷冻体积为0.2ml,在-20℃中短暂平衡5分钟,进入液氮罐中,距离液氮面25cm、15cm、5cm,每级均停留4分钟,然后浸入液氮中保存,距离液氮面5cm、15cm、25cm,每级停留6分钟,进入35℃水浴解冻,解冻后的胚胎用解冻液冲洗3~5次,然后放入新鲜海水中培养.其中9＃玻璃化液解冻后成活率达13％,变态率达8％,其余四组玻璃化液解冻后胚胎成活率达8％左右,变态率4％左右.其次,孵化前的担轮幼虫经冷冻保存的存活率也较好,用9＃、10＃、16＃玻璃化液保存,解冻后分别获得了3~6％的成活率,而用1＃、3＃玻璃化液保存,则仅见1~2个幼体微弱旋转,换新鲜海水培养后,幼体死亡.其余各时期采用各种玻璃化液保存,均未见成活个体.
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