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目的:通过体内和体外实验观察清热、养血活血、化痰及其合方对人乳腺癌MCF-7细胞增殖、裸鼠MCF-7细胞移植瘤生长抑制作用及对PLC-γ1介导的信号转导通路的影响,研究清热、活血、化痰及其合方治疗乳腺癌的机理,探讨热毒、血瘀、痰浊及血虚与乳腺癌癌变和PLC-γ1介导的信号转导的关系。
方法:分为体外和体内实验两部分。体外实验以人乳腺癌MCF-7细胞为实验对象,用清热、养血活血、化痰及其合方处理细胞,在倒置显微镜下观察MCF-7细胞形态的改变;用MTT法检测对MCF-7细胞生长的影响;用Westernblot检测MCF-7细胞IGF-1R、PLC-γ1、PKCα、MARCKS蛋白表达;用Fura-2/AM荧光标记方法测定细胞内游离钙离子浓度([ca2+]i)。体内实验以裸鼠MCF-7细胞移植瘤为实验对象,应用Westernblot检测移植瘤组织IGF-1R、VEGF、PDGFR、PLC-γ1、PKCα、MARCKS蛋白表达;HE染色进行病理观察;免疫组化法(SABC法)检测VEGF蛋白表达和肿瘤微血管密度。
结果:1.清热、养血活血、化痰及其合方对MCF-7细胞增殖具有明显抑制作用,随药物浓度的增加,对细胞生长抑制呈现剂量—效应依赖关系,对细胞形态作用明显不同,以合方组作用最强;2.乳腺癌MCF-7细胞可检测到高表达的IGF-1R、PLC-γ1、PKCα、MARCKS蛋白分子;3.当用IC50药物剂量处理细胞时,清热、养血活血、化痰及其合方均能抑制IGF-1R-PLC-γ1-PKCα-MARCKS信号通路各蛋白表达水平,降低钙离子浓度,其中合方组最强;4.清热、养血活血、化痰及其合方可不同程度地抑制裸鼠移植瘤生长及其血管生成;5.清热、养血活血、化痰及其合方可减弱移植瘤组织中IGF-1R、PDGFR、VEGF、PLC-γ1、PKCα、MARCKS等蛋白分子表达,以合方组作用最好。
结论:1.PLC-γ1介导的信号转导参与乳腺癌细胞的生长和增殖;2.清热、养血活血、化痰及其合方可通过不同程度的抑制生长因子-PLC-γ1信号转导而抑制MCF-7细胞增殖、裸鼠MCF-7细胞移植瘤生长及肿瘤血管生成;3.肿瘤病机中的痰浊、瘀血、热毒与生长因子-PLC-γ1信号转导增强、血管生成有密切关系。