漆酶是一种含铜的多酚氧化酶,其催化效率高,作用底物范围广,在工业中具有广阔应用前景。本课题利用实验室获得的重组解淀粉芽孢杆菌漆酶为基础,通过交联酶聚集体(CLEAs)来进行漆酶的固定。对其中影响酶活性的相关因素进行了优化,对游离酶和磁性交联漆酶聚集体(magnetic cross-linked enzyme aggregates,M-CLEAs)酶学性质进行了分析,对漆酶M-CLEAs在染料降解方面进行应用,结果如下:优化后的固定条件为:以饱和硫酸铵为沉淀剂,硫酸铵和漆酶体积比为3:1,沉淀温度25℃,沉淀3 h后,使用0.16%戊二醛,交联1 h,加入的磁性纳米粒子与漆酶最优质量比为7:1,在此制备条件下,最终酶活回收率为37%。与游离酶相比,漆酶M-CLEAs适应的pH值范围更广,在pH值8.6下相对酶活仍保留50%,而游离酶相对酶活只有25%;在不同体积分数的有机溶剂下,漆酶M-CLEAs的稳定性更好,30%浓度甲醇下漆酶M-CLEAs的酶活是游离酶的1.5倍,在添加较高浓度30%乙醇、丙酮条件下,漆酶M-CLEAs的酶活也均优于游离漆酶;在添加不同浓度NaCl后,漆酶M-CLEAs表现出更好地耐盐性,在高浓度1 M NaCl下,漆酶M-CLEAs保留70%的酶活,而游离漆酶只保留20%酶活。漆酶M-CLEAs在无介体存在时对不同结构的染料脱色效果较差,介体乙酰丁香酮的添加促进了酶与染料的氧化反应,6 h内对靛红可以完全脱色,活性黑5的脱色率达到90%以上,对RB亮蓝也有64%的脱色率;随着活性黑5和靛红染料浓度分别提高到160 mg/L和100 mg/L,在6 h后也同样完全脱色;在重复降解靛红实验中,反复使用七次,仍有接近30%脱色率,为固定化漆酶应用于染料废水的处理奠定了基础。