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目的:子宫内膜蜕膜化是正常妊娠和胚胎着床的一个重要特征,然而,蜕膜化的分子机制尚不清楚。已有研究表明Micro RNAs(miRNAs)在基因差异表达的精细调控中发挥了重要作用,但是micro RNA对蜕膜化这一过程调控的报道甚少,在课题组前期的研究中,小RNA芯片分析的结果显示mmu-miR-96在小鼠早孕第一天表达量最高,第五天着床点的表达比着床旁高,因此通过荧光定量PCR和原位杂交的方法验证了mmu-miR-96在小鼠早孕期子宫内膜的差异表达规律,通过建立体内及体外人工诱导蜕膜化模型探究mmu-miR-96对蜕膜化过程可能产生的影响,并运用了靶基因预测数据库检索了mmu-miR-96调控的靶基因,最后通过Western blot和荧光素酶报告基因对靶基因进行进一步验证,这为进一步研究micro RNA对蜕膜化的调控提供了实验依据。方法:(1)荧光定量PCR(RT-PCR)验证小RNA芯片分析的结果,原位杂交方法检测mmu-miR-96在早孕小鼠胚胎着床前后的定位表达。(2)通过体内人工诱导蜕膜化,研究了mmu-miR-96对子宫内膜的蜕膜化的调控作用。(3)分离和培养原代子宫内膜基质细胞,转染mmu-miR-96抑制剂和模拟物后体外人工诱导蜕膜化,RT-PCR检测蜕膜化标志物的变化,并用流式细胞术检测了对细胞凋亡和周期的影响,然后分离培养原代蜕膜细胞,转染mmu-miR-96模拟物后应用流式细胞术检测细胞凋亡和周期的变化。(4)通过miRbase,PicTar,TargetScan靶基因数据库预测mmu-miR-96的靶基因,并结合前期全基因组测序分析的结果得到预测的可能的一个靶基因,最后采用Western blot和荧光素酶报告基因进一步证明Bcl2是mmu-miR-96作用的靶基因。结果:(1)荧光定量PCR结果显示mmu-miR-96在小鼠早孕期子宫内膜差异表达,mmu-miR-96在早孕第五天着床点的表达量明显高于着床旁,该结果与芯片分析的结果一致。(2)原位杂交结果显示mmu-miR-96于早孕第一天表达在腔上皮,第四天在基质细胞有少量表达,但是在早孕第五天mmu-miR-96主要表达在基质细胞和胚泡,第六天和第七天它在次级蜕膜区广泛表达。(3)成功建立体内人工诱导蜕膜化模型,诱导蜕膜化组的子宫形成蜕膜鼓包,且该组mmu-miR-96的表达量明显高于对照组。(4)在子宫内膜基质细胞中转染mmu-miR-96模拟物后诱导蜕膜化,和对照组相比,诱导蜕膜化组dtPRP的表达水平明显下降,流式细胞术结果显示过表达mmu-miR-96后会使基质细胞的凋亡率增加,但是对细胞周期没有影响,转染抑制剂后细胞凋亡没有变化,同时还发现过表达mmu-miR-96也会使蜕膜细胞的凋亡率增加。(5)通过生物信息学分析和前期测序的结果发现mmu-miR-96可能作用的三个靶基因:Bcl2,Bcl212,Bcl213,最后预测Bcl2更有可能mmu-miR-96的靶基因,Western blot结果表明过表达mmu-miR-96后Bcl2的蛋白水平明显下降,且荧光素酶报告基因的结果显示,和对照组相比,过表达mmu-miR-96后荧光素酶的活性明显降低,这提示miR-96通过与Bcl2 3‘UTR特异性结合降低报告基因荧光素酶活性,以上数据证明了Bcl2是mmu-miR-96作用的靶基因。结论:mmu-miR-96可能参与调控蜕膜细胞的凋亡,为胎儿的生长维持提供营养并维持妊娠,最后mmu-miR-96通过负性调控Bcl2参与基质细胞的凋亡,在胚胎着床过程中发挥作用。