微生物谷氨酰胺转胺酶的发酵及其在大鼠创伤愈合中的应用研究

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谷氨酰胺转胺酶(EC2.3.2.13,蛋白质-谷氨酸-γ谷氨酰胺转胺酶,Transglutaminase,缩写为TGase)可催化蛋白质分子间或分子内共价键的形成,从而改变各种蛋白质的功能性质,在食品、化妆品、医药等领域具有广阔的应用前景。传统上TGase主要从动物组织提取,但基于经济上的考虑,必须去寻求更便利及经济的来源,微生物发酵法原料廉价,生产成本低,是进行大规模工业化生产最有效的方法。本文主要研究了维生素对Streptoverticillium SG 215发酵生产MTG的影响,并优化了其添加量以期提高发酵单位酶活力;并在实验室优化工艺的基础上建立了其分批发酵的动力学方程;最后探索研究了微生物谷氨酰胺转胺酶对大鼠创伤的促愈合作用。顺序采用Plackett-Burrman设计、最速上升法以及中心组合方法研究了维生素B1等9种维生素对Streptoverticillium SG 215生产谷氨酰胺转胺酶的影响。结果表明泛酸钙和对氨基苯甲酸对MTG的发酵具有显著性的促进作用。中心组合优化得到发酵培养基中最佳的维生素组合是VB1 20mg/L,VB2 0.5mg/L,烟酸6mg/L,泛酸钙0.028mg/L,烟酸吡多醇0.50mg/L,生物素20mg/L,对氨基苯甲酸0.044mg/L,叶酸0.4mg/L,吡哆醛盐酸盐0.2mg/L,其发酵末MTG活力达2.42U/ml,较未添加维生素之前(1.58U/ml)提高了41.77%。对谷氨酰胺转胺酶生产菌Streptoverticillium SG 215分批发酵动力学模型进行了研究。建立了比较合理的谷氨酰胺转胺酶分批发酵动力学模型:细胞生长动力学模型为:(?);MTG合成动力学模型为:(?);葡萄糖消耗动力学模型为:(?)。模型的计算结果和试验测定值吻合较好,基本能反映发酵过程中相关指标的变化规律,可用于发酵产量的预测。最后研究了微生物谷氨酰胺转胺酶对大鼠创伤的促愈合作用。结果实验组创面愈合时间平均为18.1天,较对照组平均缩短了2-3天(P<0.05);创伤愈合率显著提高(P<0.05或P<0.01);伤腔容积明显缩小(P<0.05);实验组肉芽干湿重较对照组显著增加(P<0.05),肉芽中蛋白质、氨基已糖和己糖醛酸含量增加显著(P<0.05)。结果显示谷氨酰胺转胺酶具有促进大鼠皮肤创伤愈合的作用。
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