珊瑚/骨髓基质细胞/富血小板血浆组织工程骨修复犬下颌骨缺损的实验研究

来源 :南京大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:luijia2006
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因肿瘤切除或外伤等因素造成的颌骨缺损,可引起患者面部畸形及咀嚼、语言和吞咽等功能障碍,需即刻或延期修复。目前临床上出现的颌骨缺损常用自体骨移植修复。自体骨中含有部分存活的骨细胞,可早期与受植床建立血液循环,成骨潜能大,手术容易获得成功。但自体骨移植存在着供骨量有限、易产生供区并发症、供区骨形态难以与受植区形态匹配等缺陷。组织工程技术的发展为颌骨缺损的修复提供了一种全新的方法。   骨是最早在实验室获得组织工程化的组织之一,是最有希望进入临床应用的组织。种子细胞、支架材料和生长因子是骨组织工程应用研究中的三大要素。目前组织工程骨的研究已进入到临床应用前期阶段。   本研究选用骨髓基质细胞(Marrow stromal cells,MSCs)为种子细胞,珊瑚(羟基磷灰石材料)为支架材料、富血小板血浆(Platelet-richplasma,PRP)为生长因子构建复合物,并将其用于修复犬下颌骨方块缺损,观察其成骨能力和最终骨修复效果,为临床应用提供实验依据。   实验一珊瑚/骨髓基质细胞/富血小板血浆复合物的体外培养   目的:观察PRP对珊瑚支架上MSCs的增殖和成骨分化的影响。   方法:从犬髂骨抽取骨髓。培养并扩增和诱导而得到骨髓基质细胞。取100μl细胞浓度为1.0×107/ml的MSCs悬液与同一来源的等量PRP混合,将混合液滴加到直径8 mm、厚2 mm的珊瑚(羟基磷灰石材料)圆片上,再滴加20μl的牛凝血酶溶液,使之形成珊瑚/MSCs/PRP复合物,珊瑚(羟基磷灰石材料)/MSCs复合物作对照,在适宜条件下继续培养。在培养的第7天和14天,抽取1ml培养液并检测其中的碱性磷酸酶(alkalinephosphatase,ALP)活性和骨钙素(osteocalcin,OC)含量。   结果:珊瑚/MSCs/PRP组培养液中的ALP活性和OC含量均明显大于珊瑚/MSCs组(P<0.05)。   结论:PRP可促进珊瑚(羟基磷灰石材料)支架上MSCs的增殖和向成骨细胞分化。   实验二珊瑚/骨髓基质细胞/富血小板血浆复合物修复犬下颌骨缺损   目的:评价珊瑚/MSCs/PRP复合物修复颌骨极限缺损的效果。   方法:从犬髂骨抽取骨髓。培养并扩增和诱导而得到骨髓基质细胞。取1ml细胞浓度为1.0×107/ml的MSCs悬液与同一来源的等量PRP混合,将混合液滴加到20×10×8mm大小的珊瑚支架上,再滴加300μl的牛凝血酶溶液,形成珊瑚/MSCs/PRP复合物。将复合物修复细胞来源犬的下颌骨体部20×10mm大小缺损。以取自对侧下颌的自体骨和单纯珊瑚植入作对照。在术后第6周和第12周,分别进行大体观察、组织切片和组织切片形态测量分析,来评价珊瑚/MSCs/PRP复合物修复颌骨缺损的效果。   结果:珊瑚/MSCs/PRP组,术后6周,可见修复区珊瑚孔洞内有淡红色组织充填,质地较韧,与周边骨床之间有轻度动度,12周,缺损区珊瑚材料基本消失,由骨样组织充填,与周边骨边界不清,与周围组织之间动度消失;自体骨移植组,术后6周,缺损区再植的颌骨与周边骨床基本融合,无明显动度,12周,移植骨与周边骨床完全融为一体,边界不清;单纯珊瑚组,术后6周,珊瑚支架材料清晰可见,与周边骨床有明显边界,12周,缺损区珊瑚材料基本消失,但骨缺损区中部质软,形成凹陷,与周围骨床边界清楚。组织学观察显示:珊瑚/MSCs/PRP组,术后6周,可见较多的新骨形成在缺损区珊瑚表面及其孔隙内,周边处可见珊瑚部分被吸收替代,12周,缺损区基本被成熟骨组织替代,珊瑚大部分降解吸收,但近中心区仍可见少量珊瑚残留;自体骨修复组,术后6周,再植的颌骨周边可见新骨形成。12周,植入区与周围无明显边界,其结构与周边骨相同;单纯珊瑚组,术后6周,可见纤维组织包绕珊瑚样结构,局部有少量新骨形成,12周,中心部分为纤维组织样结构,周边可见较多新骨修复,局部仍可见珊瑚残留。组织形态测量分析显示:术后6周和12周,珊瑚/MSCs/PRP组的成骨量明显多于珊瑚组(P<0.05);珊瑚/MSCs/PRP组虽然成骨量均少于自体骨,但在12周时两者即无明显差异(P>0.05)。   结论:珊瑚/MSCs/PRP复合物具有良好的骨修复能力,是较理想的骨移植替代材料。
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