论文部分内容阅读
目的：褪黑素（Melatonin，Mel），化学名称：N-已酰基-5-甲氧基色胺，主要是松果体分泌的一种吲哚胺类激素。其作用相当广泛，可诱导自然睡眠、延缓衰老、提高机体免疫力，近年来，其预防、治疗肿瘤和延缓癌症发展的作用越来越受到人们关注。本文通过Ames试验和肿瘤细胞培养来观察褪黑素的抗诱变及抗肿瘤作用，并初步探讨其机理。 方法：（1）Mel致突变试验：平板掺入法，选用TA98、TA100两个菌株，以0.1ml／皿DMSO为阴性对照，每皿分别加入Mel 5000μg、500μg、50μg、5μg、0.5μg，每个剂量组三个平行样。37℃培养48-72小时，观察不同剂量组的回变菌落数。加S9和不加S9分别进行，试验重复两次。（2）Mel抗突变试验：平板掺入法，不加S9时，TA98用12.5μg／皿的Dexon，TA100用0.25μg／皿的叠氮钠为阳性对照，二者均以0.1ml／皿的DMSO为阴性对照，每皿分别加入5000μg、500μg、50μg、5μg、0.5μg的Mel，37℃培养48-72小时，观察不同剂量组的回变菌落数。每个剂量组三个平行样，试验重复两次。加S9时，TA98和TA100均以10μg／皿的2-AF为阳性对照，其余步骤同不加S9。（3）选用体外培养的MCF-7人类乳腺癌细胞，分别进行细胞毒性试验，不同剂量组肿瘤细胞生长状况观察（包括细胞分裂指数、细胞贴壁率、细胞生长曲线、染料排除试验、平板克隆形成试验及光镜下凋亡细胞鉴定）和免疫组化检测肿瘤相关基因bcl-2和p53的表达。 结果：（1）Mel致突变试验：加与不加S9，各剂量组与阴性对照组相比，其回变菌落数差别无显著性（P＞0.05）。（2）Mel抗突变试验：加S9和不加S9，各剂量组回变菌落数低于阳性对照组（P＜0.05）。（3）细胞毒性试验：Mel之IC30硕士学位论文为0.89nunol/L，IC沁为2.38咖01/L.（4）培养48小时，5%DMSO组和IC，组Ml无显著性差别（乃0.05），二者M工均高于工C*组。培养96小时，5%D溺O组、IC30组和IC50组均不同，随着Mel剂量增大，M工减小。（5）培养4小时，IC二组和IC刃组细胞贴壁率相同（乃0.05），二者均低于5%D MSO组。培养8小时，各组间细胞贴壁率未见显著性差异。培养16小时，各组间细胞贴壁率均不同 （只0.05），5%DMSO组小于IC刃组，IC二组小于IC”组（只0.05），随Mel剂量增大，细胞贴壁率减小。（6）工C。的Mel使狱F一7细胞的倍增时间由对照组 （5%DMSO组）的的3.51天延长到加药组（工C30组）的5.75天。（7）各剂量组之间的细胞存活率均有显著性差异（只0.05），且随Mel剂量增大，细胞存活率有减小趋势。（8）接种细胞数分别为50个/孔、100个/孔和200个/孔时，各剂量组之间克隆形成数有显著性差别（只0.05），随Mel剂量增大，细胞克隆数减小。（9）工C30组和工C，组AI无显著性差异（乃0.05），但二者均高于5%D MSO组（只0.05）。（10）肿瘤相关基因蛋白表达:bcl一2的表达在工C30组和工C*组均低于对照组（只0.05），IC3。组和工C50组的p53表达均高于对照组（只0.05）。结论:（1） Mel本身无致突变作用。（2） Mel能在一定程度上抵抗致突变物和前致突变物所致的回复突变，具有抗突变作用。（3）在一定剂量范围内Mel可降低肿瘤细胞活力，抑制肿瘤细胞增殖。（4） Mel可抑制癌基因bcl一2的表达并促进抑癌基因p53的表达，以阻断细胞周期，诱导细胞凋亡，从而对肿瘤细胞增殖发挥抑制作用。