益智糖聚物的分离纯化、结构鉴定及抗阿尔茨海默病活性研究

来源 :广东药科大学 | 被引量 : 1次 | 上传用户:iam156
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本文以益智(Alpinia oxyphylla Miq.)糖聚物为研究对象,深入考察其体内抗阿尔茨海默病活性,进一步分离纯化益智粗糖聚物得到均一糖聚物,并对其进行结构鉴定。通过水提醇沉和碱提醇沉两种方法得到益智的四种粗糖聚物AO50、AO70、AO90和AOB。通过腹腔注射1 mg/kg氢溴酸东莨菪碱成功构建阿尔茨海默病(AD)小鼠模型。应用行为学实验评价益智粗糖聚物对AD模型小鼠学习记忆能力以及焦虑行为的影响。结果表明益智粗糖聚物(500mg/kg)显著提高AD小鼠的学习记忆能力,改善其焦虑行为,并且与阳性药石杉碱甲(2 mg/kg)相比,无显著性差异。在生化指标检测中,益智粗糖聚物显著降低AD小鼠脑组织和血清中NO、IL-6、IL-1β、TNF-α和PGE-2的水平;提高小鼠体内GSH和SOD的水平;降低MDA水平。表明益智粗糖聚物可能通过调节炎症因子和氧化应激因子的表达发挥抗阿尔茨海默病的作用。利用气-质联用技术进行代谢组学研究,结果表明益智糖聚物AO50、AO70、AO90和AOB可调节AD小鼠的生物标志物含量,即调节其代谢物水平趋近于正常组,进一步表明益智粗糖聚物具有显著的抗阿尔茨海默病活性。基于益智粗糖聚物良好的体内抗阿尔茨海默病活性,对益智粗糖聚物AO50、AO70和AO90分别进行脱蛋白、透析和冻干,再运用DEAE-Cellulose 52和Sephadex G-75柱层析对其进行分离纯化,得到七个均一糖聚物AOP50-2-1、AOP70-1、AOP70-2-1、AOP70-2-2、AOP70-3-1、AOP70-3-2和AOP90-2。比旋光度法和HPGPC法检测结果显示其均为均一糖聚物,相对分子量分别为72.45 kDa、5.33 kDa、76.66 kDa、16.53 kDa、36.85 kDa、12.20 kDa和1.83 kDa。通过PMP柱前衍生化-HPLC法测定其单糖组成,完全甲基化-GC-MS测定其糖残基种类和比例,再结合1D和2D NMR技术分析各糖残基的连接位点,对七个均一糖聚物的结构分别进行鉴定。结果表明AOP50-2-1、AOP70-1、AOP70-2-1、AOP70-2-2、AOP70-3-1、AOP70-3-2和AOP90-2均为酸性杂多糖,AOP70-1表面有不规则的圆形凹陷,且粗糙有网状纹理;AOP70-2-1呈不规则片状结构,表面有粗糙的褶皱;AOP70-2-2呈不规则片状,表面比较平滑;AOP70-3-1呈多片层堆积而成的疏松立体结构;AOP70-3-2呈细丝状结构,分布零散,表面粗糙有褶皱;AOP90-2呈碎屑状结构,其表面有孔状凹陷。七个益智均一糖聚物结构均未见文献报道。
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