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目的:肌萎缩侧索硬化(amyotrophic lateral sclerosis, ALS )是一种慢性致死性中枢神经系统进行性变性疾病,以选择性大脑皮层、脑干及脊髓前角运动神经元丢失为特征,是运动神经元病(Motor Neuron Disease, MND)中最常见的类型【1】,也被称为“神经系统的癌症”。临床特点是40岁以上的中老年多发,男性较多见,起病缓慢,进行性发展,逐渐出现四肢肌肉无力,萎缩,腱反射可活跃,并可有病理反射,多数ALS患者在首次症状出现后的3~5年内因呼吸衰竭而死亡。根据其发病特点分为家族型肌萎缩侧索硬化Familial Amyotrophic Lateral Sclerosis, FALS)和散发型肌萎缩侧索硬化(Sporadic Amyotrophic Lateral Sclerosis, SALS)。其中SALS占90%以上,其发病机制不清,可能主要与以下几个方面有关:1.谷氨酸的兴奋毒作用; 2. Ca2+超载; 3.自由基的毒性作用; 4.免疫机制; 5.线粒体功能异常; 6.神经丝的过度磷酸化; 7.神经营养因子缺乏。胰岛素样生长因子作为一种神经营养因子对促进神经元的生存和抑制其凋亡起到重要作用,同时也可能具有促进神经元再生的作用,胰岛素样生长因子结合蛋白作为特定的载体能够与之结合,并对于胰岛素样生长因子的转运,分布以及半衰期和生物活性的调节至关重要,因此这些结合蛋白的表达量的变化很可能会影响其发挥正常的生物调节作用,但目前这类蛋白表达量的改变在肌萎缩侧索硬化这一疾病上的国内未见研究报道,本实验研究目的是检测肌萎缩侧索硬化模型SOD1-G93A转基因小鼠腰膨大胰岛素样生长因子结合蛋白2和4的表达量,并比较发病前后的改变。方法:1.实验动物分组36只SOD1-G93A转基因小鼠分为同窝对照组、症状前期组、症状早期组(采用snowG93A肢体评分法规定临床评分=2.0分即clinical onset)及终末期组(采用snowG93A肢体评分法规定临床评分=5.0分即endstage),每组9只。2.标本获取对各组动物同窝对照组、症状前期组、症状早期组(用snowG93A肢体评分法规定临床评分=2.0分)及终末期组(采用snowG93A肢体评分法规定临床评分=5.0分)分不同时期将动物全身麻醉后迅速摘眼球放血并立即断头从椎管中取出脊髓,快速小心剥去软脊膜及脊神经节和神经根,取腰膨大部位立即置液氮冷冻后迅速放置-800C保存。3.IGFBP2和4的检测应用蛋白印迹法(western blot)检测各组腰膨大组织蛋白,应用蛋白抽提试剂盒,严格按制造商说明书进行提取组织总蛋白,再用BCA Protein Assay Kit测定蛋白浓度,根据预试验结果各组均取50μg样本组织总蛋白经十二烷基磺酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS- PAGE)凝胶上电泳后,转印蛋白至PVDF膜,5%脱脂奶粉封闭特异性抗原,分别加抗小鼠IGFBP-2单克隆抗体,抗兔IGFBP-4多克隆抗体,放置摇床40C过夜,次日先TPBS洗3次,每次10分钟,用IRDye ? 800- conjugated羊抗兔二抗和IRDye ? 700-conjugated羊抗小鼠二抗室温下摇床避光,TPBS及PBS洗膜后Odyssey红外扫膜仪扫描显影。4.结果在SOD1-G93A转基因小鼠腰膨大组织中胰岛素样生长因子结合蛋白2在症状早期组和终末期组相对密度值(0.28667±0.13和0.44667±0.16)较同窝对照组和症状前期组(0.16000±0.04和0.13667±0.05)有明显的升高,P<0.05有统计学意义,而胰岛素样生长因子结合蛋白4的表达量四组之间没有明显改变。5.结论肌萎缩侧索硬化模型SOD1-G93A转基因小鼠腰髓组织中胰岛素样生长因子结合蛋白2的表达量在症状早期和终末期较同窝对照组和症状前期组增加,可能与疾病的发生及进展有相关性。而胰岛素样生长因子结合蛋白4的表达量各组间无明显差异,不能说明与本病存在相关性。