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金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus,S.aureus)是常见的食源性致病菌,广泛存在于自然环境中;S.aureus在适当的条件线,能够产生肠毒素,引起食物中毒。S.aureus是奶牛乳房炎的主要病原菌,抗生素的滥用导致耐药性金黄色葡萄球菌的出现并泛滥,同时增加了多重耐药的危险,这对人类的健康造成直接威胁。因此,对于食源性耐甲氧西林金黄色葡萄球菌的耐药性及危害性的研究关乎人类的身心健康,具有积极的意义。本次研究从济南市各大奶牛场采集130份生牛乳样品,利用生化鉴定法鉴定出样品中的S.aureus;利用基质辅助激光解吸电离-飞行时间-质谱(MALDI-TOFMS)技术对金黄色葡萄球菌进行鉴定,验证其快速检测食源致病菌的可行性;采用金黄色葡萄球菌肠毒素检测试剂盒对鉴定出的S.aureus进行肠毒素检测;利用PCR法对S.aureus肠毒素进行分型;采用微量肉汤稀释法进行抗生素敏感实验,检测S.aureus主要研究结果如下:(1)采集的130份生鲜牛乳样品来自济南6个不同地区,采集形式分为生鲜乳收购站采集样品与奶牛运输车采集样品,利用传统生化鉴定与API法鉴定,共有57份样品判定检出金黄色葡萄球菌,平均检出率为44.62%。JA1到JA6地区生鲜乳样均有金黄色葡萄球菌检出,从实验结果可以看出,6个地区生鲜乳收购站样品中金黄色葡萄球菌检出率均高于生鲜乳运输车;虽然污染程度差异明显,但总体污染程度均低于1000CFU/ml。(2)对实验获得的57株金黄色葡萄球菌进行肠毒素的检测,利用酶联免疫法与胶体金快速检测试纸条鉴定出11株产肠毒素菌株,产毒结果为SEA型、SEB型和SEB型。利用PCR法对57株金黄色葡萄球菌进行肠毒素基因的检测,肠毒素基因分型结果显示,共有57株菌株中共有有SEA、SEB、SEC、SEE、SEG和SHE型6种肠毒素基因型,各类型的肠毒素菌株在地区分部较为均匀,差异不明显,其中以SEG和SHE型肠毒素的菌株数量最多(SEG:52.63%,30/57;SHE:36.84%,21/57)。(3)对57株金黄色葡萄球菌进行药物敏感实验,利用微量肉汤稀释法,选取12种抗生素药物,结果发现,对青霉素耐药的菌株最多,耐药率87.72%,其次为氨苄西林,耐药率84.21%,另外对红霉素,克林霉素的耐药性也较高;共有50株金黄色葡萄球菌均具有多重耐药性;多重耐药菌株主要来自JA1、JA2、JA3地区,在这其中以耐3种药物与耐5种药物的菌株数量最高,而耐药谱种类较多,受地区间差异影响较大。(4)利用MALDI-TOF MS检测鉴定样品中的金黄色葡萄球菌,与传统生化鉴定发和API法进行对比,MALDI-TOF MS对57株金黄色葡萄球菌在属水平上的鉴定结果可信度均超过了95%,与传统生化鉴定和API法结果一致。证明了MALDI-TOF MS在食源性致病菌检测方面的稳定性良好,同时其检测速度快,高通量,相比其他方法优势较大。同时对57株细菌进行蛋白指纹图谱的聚类分析,对菌株之间的同源性进行比较,按照50%相似性即500处作为判定水平,57株金黄色葡萄球菌被分为5个类型,6个地区的样品混合分布于5个聚类分析类型里。(5)将MALDI-TOF MS方法收集到的质谱图进行分析,将菌株的耐药性结果与蛋白指纹图谱进行比较,研究发现MALDI-TOF MS可以快速检测抗β-内酰胺类抗生素药物的金黄色葡萄球菌,在质谱图中表现出了特殊的峰值;对耐氨基糖苷类、氯霉素、克雷霉素类抗生素的金黄色葡萄球菌也能够检测鉴定。