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目的:(1)通过对石油醚(J石)、超临界 CO2(J超)、压榨法(J压)、水蒸气法(J水)四种方式提取的莪术中姜黄素对 Hela细胞影响的研究,筛选出药物的最佳提取方式;(2)探讨J压对宫颈癌Hela细胞荷瘤裸鼠的治疗作用及其可能的作用机制。 方法:采用MTT法检测四种方式提取的姜黄素作用于Hela细胞72h后对细胞增殖抑制率及IC50的影响,并检测乳酸脱氢酶(LDH)的活性;以48只Balb/c雌性裸鼠为受试对象,8只予腋下接种0.2ml生理盐水(NS,正常对照组),其余40只裸鼠采用腋下接种 Hela细胞(3×106个/只)建立宫颈癌裸鼠模型。建模裸鼠随机分为5组(n=8):模型组(NS)、阳性药对照组(5-Fu)、J压高剂量组(240mg/kg)、J压中剂量组(120mg/kg)、J压低剂量组(60mg/kg),共计6个实验组。检测瘤重、瘤体积计算抑瘤率;凝固法检测裸鼠凝血功能;HE染色观察肿瘤组织病理组织学改变;免疫组化法检测肿瘤组织 CD105的表达计数微血管密度(MVD)并检测 VEGF、IFN-γ的表达;流式细胞仪检测肿瘤组织细胞周期和凋亡率。 结果:(1)四种工艺提取的姜黄素对宫颈癌Hela细胞的生长都有明显的抑制作用,最高抑制率可分别为:J石86.48%±4.92%,J超93.86%±4.01%,J压99.13%±1.09%,J水93.35%±2.64%,且呈现出一定的剂量依赖关系;其中 J压在320μg/ml时抑制效果最明显,IC50为96.86μg/ml,最大LDH值为413.10±16.76U/L。(2)J压高、中、低剂量组瘤重与模型组比较明显减轻(P<0.05,P<0.01);高、中剂量组瘤体积与模型组比较明显缩小(P<0.01),J压高、中、低剂量组抑瘤率分别达59.56%、32.43%、20.14%;凝血功能结果显示,模型组 PT、TT、APTT与正常对照组比较明显缩短(P<0.05,P<0.01),J压高、中、低剂量组与模型组相比显著延长(P<0.05,P<0.01);免疫组化检测肿瘤组织CD105、VEGF和IFN-γ的表达:J压高、中剂量组CD105的表达较模型组明显降低(P<0.05);J压高、中剂量组 VEGF的表达较模型组明显降低(P<0.01);J压高、中、低剂量组 IFN-γ的表达较模型组升高(P<0.05,P<0.01);流式细胞仪检测:J压高、中、低剂量组的凋亡率较模型组明显增加(P<0.01),高剂量组的G0-G1期细胞率较模型组明显增高、G2/M期的细胞率较模型组明显降低(P<0.05,P<0.01)。 结论:(1)四种方式提取的姜黄素均可不同程度抑制宫颈癌Hela细胞的生长,J压的抑制效果最好;(2)宫颈癌模型荷瘤裸鼠造模成功;(3)姜黄素能缩小肿瘤体积、减轻瘤重,对宫颈癌模型荷瘤裸鼠具有一定的治疗作用,其机制可能是:①姜黄素可降低促血管形成因子 VEGF的表达,升高血管形成抑制因子IFN-γ的表达,从而抑制新生血管形成,减少肿瘤组织的血液及营养供应,从而发挥治疗作用;②姜黄素可改善宫颈癌裸鼠的血液高凝状态,从而发挥抗血栓形成作用;③姜黄素使肿瘤细胞处于 G0-G1期,抑制肿瘤细胞的分裂增生,从而减缓肿瘤的发展进程。