枸杞提取物对小胶质/巨噬细胞和自噬在大鼠视神经部分切断后的调节作用

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目的:枸杞子是我国传统的中草药,在中医理论中认为其具有清肝明目的功效。枸杞提取物(Lycium barbarum extracts,LBE)是枸杞的水溶性提取物,已有的研究表明LBE对视觉损伤疾病及其它一些神经系统疾病有很好的治疗作用,但其机制还不完全清楚。已知LBE对小胶质/巨噬细胞和自噬有一定调节作用,但有关的研究还不够完善。小胶质细胞/巨噬细胞有不同的表型,分别是促进组织损伤的M1型和有利于组织修复的M2型。本研究旨在进一步探索视神经部分切断(Partial optic nerve transection,PONT)后LBE对小胶质/巨噬细胞的极化和自噬的调节。方法:采用成年雌性SD大鼠在右眼颞部PONT,将其分为三大部分。一,PONT后将DiI颗粒放入损伤部位逆行性标记视网膜神经节细胞(retinal ganglion cel s,RGCs),确定原发性损伤的RGCs的分布;二,正常组(Normal)与PONT后饲养1/4周后取材,用荧光金逆行性标记RGCs观察其存活,免疫荧光和Western blot来检测小胶质/巨噬细胞及自噬的表达情况;三,PONT+PBS组和PONT+LBE组(术前一周开始通过灌胃给予0.01mol/L PBS缓冲液或1 mg/kg的LBE干预直到术后1/4周结束)取材,用荧光金逆行性标记RGCs观察其存活并检测小胶质/巨噬细胞及自噬的表达情况。结果:1.PONT后颞侧视网膜上DiI标记的RGCs多于鼻侧;2.荧光金标记的RGCs在PONT 1周/4周时鼻侧存活率分别是83.3±3.4%/67.1±8.8%,颞侧存活率分别是65.9±4.5%/38.9±8.2%,鼻侧明显多于颞侧;同时在PONT 1周时发现CD68,iNOS,Arginase-1,LC3 II表达量与正常相比明显增多;3.喂LBE 4周后鼻侧视网膜RGCs的存活数量较PBS组多,喂LBE 1周时激活的小胶质/巨噬细胞增多,其中M2型产生的Arginase-1的蛋白表达水平明显升高,而自噬标记物(LC3 II)表达量显著降低。结论:1.DiI标记显示视神经颞侧PONT后主要切断的是颞侧RGCs的轴突,提示PONT后RGCs的原发性死亡主要发生在颞侧视网膜;而在鼻侧视网膜主要发生继发性死亡。2.PONT术后1周和4周颞侧视网膜上RGCs的死亡明显多于鼻侧;视神经中激活的总的,M1和M2型的小胶质细胞/巨噬细胞在术后1周视神经中的数目都显著增多;视神经中自噬的水平在术后1周显著升高。3.LBE可以延缓PONT 4周后RGCs的死亡;增加1周视神经中有保护作用的M2型小胶质细胞/巨噬细胞的数量;降低由PONT导致的自噬标志物的高表达。
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