金线莲丛生芽生物反应器培养及促进有效物质积累的研究

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金线莲是具有极高药用价值的珍稀植物,但其野生资源和人工栽培的产量难以满足市场需求。为了提供金线莲丛生芽作为产品生产的另一种原材料,本研究利用生物反应器培养金线莲丛生芽,探究了影响丛生芽生长和有效物质积累的因素,同时使用诱导子促进丛生芽中有效物质的生产量。为了筛选丛生芽培养的适宜培养基,用均匀设计法对MS培养基浓度和不同植物生长调节剂浓度的影响进行了研究,结果表明3/4MS培养基中加入2.0 mg·L-1 BA,0.2 mg·L-1KT和0.5 mg.L-1 NAA的组合最利于丛生芽的生长和多糖、金线莲苷、总酚及黄酮四种有效物质的积累;用均匀设计法对培养基中蔗糖、磷和氮浓度的效果进行调查的结果,蔗糖为35 g·L-1,3/4MS培养基中磷浓度为0.93 mM和氮浓度为45 mM的组合最佳。进一步对硝态氮和铵态氮浓度比的影响进行了研究,发现将3/4MS培养基中的硝态氮和铵态氮调节为30 mM和15 mM为宜。丛生芽在球体下部设支持网的反应器中生长最佳。丛生芽在反应器培养时,0~20 d为生长停滞期,20~30 d为指数生长期,30~40 d为平稳期,丛生芽在培养第30 d时四种有效物质的积累量最多。对丛生芽接种量、通气量及光照强度进行探究的结果,四种有效物质生产量在接种量为12.5 g·L-1和通气量为500 mL.min-1最多;不同的有效物质对光照强度的要求不同,2400 Lux下金线莲苷和多糖积累的最高和1600 Lux下总酚和黄酮的积累最高。利用水杨酸(SA)、茉莉酸甲酯(MeJA)和酵母提取物(YE)作为诱导子对其适宜处理时间和浓度进行了调查,当用475μM的SA处理丛生芽12 d时,最利于金线莲苷的生产;用525 μM的MeJA处理16 d时,利于黄酮的生产;SA、MeJA和YE对多糖和总酚生产均有同样的促进作用。对丛生芽提取物的抗氧化活性进行测定的结果,发现丛生芽提取物对DPPH自由基清除力呈剂量依赖性,具有一定的抗氧化能力。
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