恶性肿瘤是严重危害人类生命和健康的常见病和多发病。已有研究发现叶酸受体在多种肿瘤(如卵巢癌、肺癌、宫颈癌、乳腺癌、结直肠癌和肾细胞癌等)细胞膜上高度表达，而在正常组织上低表达甚至不表达。因此可利用叶酸受体与配体结合诱导细胞内化，将药物摄取入真核细胞胞浆，增加药物在病灶局部的浓度，降低毒副作用，达到靶向治疗目的。 本课题以长春新碱(VCR)作为模型药物，牛血清白蛋白(BSA)为载体材料，叶酸(FA)为靶头，制备叶酸受体介导的肿瘤细胞靶向给药系统。 首先采用去溶剂化-交联法制备长春新碱的牛血清白蛋白纳米粒(VCR-BSA-NP)，以VCR在纳米粒中的包封率为评价指标，通过正交试验设计得到优化处方与制备工艺(VCR与BSA的浓度比1:20、溶液pH=7，戊二醛体积0.075ml，固化时间10h)。优化工艺所制备的纳米粒包封率稳定；呈类球形体，表面光滑，平均粒径为200nm；成球率较高，绝大部分的辅料BSA能形成微粒；释药过程呈现一定的缓释效果，但是前期有个突释阶段；长期放置，则稳定性不太好。 根据FA偶联至BSA上的时机不同，分别制备了两种类型的VCR-FA-BSA-NP。Ⅰ型为在载体成球前连接配体，即先将FA偶联至BSA表面，然后由FA-BSA制备VCR-FA-BSA-NP；Ⅱ型为在载体成球后连接配体，即先制备VCR-BSA-NP，然后再将FA偶联至BSA上。经过考察发现：Ⅱ型微粒较Ⅰ型微粒分布更均匀且粒径稍小，Ⅰ型微粒约为250nm，Ⅱ型微粒则约为210nm；Ⅰ型微粒的叶酸偶联率(76.18μg/mg)明显高于Ⅱ型微粒的叶酸偶联率(65.09μg/mg)；Ⅰ型微粒的包封率(84.97％)与Ⅱ型微粒的包封率(87.01％)相当，没有明显差别；Ⅰ型VCR-FA-BSA-NP在释药初期有一定程度的突释，随后较平缓，而Ⅱ型VCR-FA-BSA-NP则一直释放平缓。 采用MTT法评价牛血清白蛋白载药纳米粒(VCR-BSAμNP)、叶酸偶联牛血清白蛋白载药纳米粒(VCR-FA-BSA-NP)和长春新碱原料药(VCR)对人子宫颈癌HeLa细胞、人结肠癌CaCo-2细胞和猴肾细胞COS-1的细胞毒性。试验结果显示：各型VCR药剂对三种细胞的毒性均有差异，且都表现出显著的浓度依赖性，药物浓度越大则毒性越强；对于Hela细胞和CaCo-2细胞，各型VCR药剂的细胞毒程度依次为VCR＜VCR-BSA-NP＜Ⅰ型VCR-FA-BSA-NP＜Ⅱ型VCR-FA-BSA-NP，其中Ⅰ、Ⅱ型VCR-FA-BSA-NP的细胞毒性却差异不大；游离VCR药物对正常细胞也具有很强的细胞毒性，而BSA-VCR-NP并没有改善这种对正常细胞的抑制杀伤作用，但是Ⅰ、Ⅱ型VCR-FA-BSA-NP对COS-1细胞的抑制率却较VCR-BSA-NP明显改善；FA的引入使得载体连接的FA和肿瘤细胞表面的叶酸受体结合产生一定的靶向作用，导致了更多肿瘤细胞被杀伤，因此VCR-BSA-NP对肿瘤细胞的毒性明显增强，并且Hela细胞的药敏性比CaCo-2细胞的药敏性强。 用异硫氰酸荧光素(FITC)标记牛血清白蛋白和叶酸偶联的牛血清白蛋白，以正常的猴肾细胞COS-1及表面表达有叶酸受体的人子宫颈癌HeLa细胞、人结肠癌CaCo-2细胞为模型细胞，进行细胞摄取机理研究。荧光倒置显微镜结果表明，FA-BSA-NP对肿瘤细胞具有主动靶向作用，细胞对它的摄取是通过肿瘤细胞表面丰富的叶酸受体介导产生的，而且由于受体-配体结合存在竞争性抑制作用，FA-BSA-NP的主动靶向性也可以被游离FA显著抑制甚至完全被阻断从而回归到BSA-NP的状况。 叶酸受体介导的白蛋白微球载药系统具有很好的产业化潜力及商机，可用于卵巢癌、结肠直肠癌、乳腺癌、肺癌等多种肿瘤的临床治疗领域，具有诱人的应用前景。