【摘 要】
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第一部分 精密肝切片技术的建立;目的:建立一种新的肝脏体外研究手段—精密肝切片技术,摸索最 佳培养条件.方法:制备肝切片,建立培养系统,以乳酸脱氢酶(LDH)漏出率、谷 胱甘
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第一部分 精密肝切片技术的建立;目的:建立一种新的肝脏体外研究手段—精密肝切片技术,摸索最 佳培养条件.方法:制备肝切片,建立培养系统,以乳酸脱氢酶(LDH)漏出率、谷 胱甘肽(GSH)含量、噻唑蓝(MTT)还原能力、蛋白含量为指标, 观察切片厚度、培养液pH值、培养容器及培养时间对肝切片活力的影响;观察不同培养时间内细胞色素P450(CYP)含量、 尿苷二磷酸葡萄糖醛酸转移酶(UDPGT)和谷胱甘肽S-转移酶 (GST)的活性变化;观察抗氧化剂GSH、阿魏酸钠(SF)对CCl<,4> 损伤肝切片活力的影响.结果:切片厚度300μm,培养液pH值7.0及使用5mL培养瓶时,4h 内肝切片活力及代谢酶活性维持良好.GSH可恢复CCl<,4>所致 多项指标的变化;SF对CCl<,4>所致肝切片指标的变化也具有一 定逆转作用.结论:精密肝切片技术可用于肝体外研究.切片厚度300μm,培养第二部分 氯化镉肝脏毒性作用—精密肝切片技术的肝脏毒理学应用;目的:观察氯化镉(CdCl<,2>)肝毒作用,评价精密肝切片技术应用于 肝脏毒理学研究的可行性.结论:精密肝切片培养系统在镉的毒理作用研究中是一敏感模型.镉具有明显肝毒效应,其机理可能与肝细胞抗氧化能力降低有关,但并非通过耗竭肝细胞内GSH而实现.在一定剂量范围内,CdCl<,2>对肝脏Ⅰ相和Ⅱ相代谢酶活性有影响;其对Ⅱ相酶的抑制使肝脏解毒功能减弱,进一步加重肝损伤.第三部分 药物对氯化镉肝毒作用的干预效应—精密肝切片在肝脏药理方面的应用;目的:观察不同作用机制的药物对CdCl<,2>肝毒效应的干预作用,进一 步评价精密肝切片培养系统用于药理学体外研究的稳定性及 敏感性.结论:NO参与药物对镉中毒肝脏的保护作用.GSH和硫宁对镉所致 肝脏酶学变化的逆转效应,在其抗镉毒过程中可能发挥重要 作用.精密肝切片培养系统于最佳条件下,具有稳定性与敏 感性的双重特点,可用于肝脏药理毒理学体外研究.
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