【摘 要】
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该文采用SD大鼠四动脉结扎全脑缺血模型,研究了慢性锂盐对NMDA受体亚基NR2A及其上游Pyk2、Src的酪氨酸磷酸化的作用以及对Src(Fyn)-PSD-95-NR2A三元复合物的水平和PSD-95介导
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该文采用SD大鼠四动脉结扎全脑缺血模型,研究了慢性锂盐对NMDA受体亚基NR2A及其上游Pyk2、Src的酪氨酸磷酸化的作用以及对Src(Fyn)-PSD-95-NR2A三元复合物的水平和PSD-95介导的Pyk2与NR2A相互作用的影响,探讨了锂盐拮抗NMDA受体介导的神经兴奋毒性的重要分子机制,为锂盐将来在临床上用来治疗神经变性疾病,特别是与兴奋毒性有关的,提供了可靠的理论基础和科学依据.1.慢性锂盐对脑缺血/再灌海马的NR2A酪氨酸磷酸化的影响;以磷酸酪氨酸抗体免疫沉淀,NR2A抗体免疫印迹,发现缺血1 5分钟再灌6小时后,NR2A的酪氨酸磷酸化水平显著增高,给LiCl组则显著降低.2.慢性锂盐对脑缺血/再灌中NR2A-PSD-95-Src/Fyn信号复合物的影响;以Src/Fyn抗体免疫沉淀,NR2A抗体或PSD-95抗体免疫印迹分析,或以PSD-95抗体免疫沉淀,NR2A抗体免疫印迹分析,发现NR2A,PSD-95,Src/Fyn三者之间均可免疫共沉淀,且相互作用在脑缺血/再灌之后增强.3.慢性锂盐对Pyk2Tyr-402位点和SrcTyr-416位点的磷酸化的影响;分别用anti-phospho-Pyk2(p-Tyr402)抗体和anti-phospho-Src(p-Tyr41 6)抗体免疫印迹,发现Pyk2和Src的磷酸化分别在6小时和1小时达到最高点,脑缺血/再灌注激活了Pyk2和Src.长期锂盐预治疗降低增强的Pyk2Tyr-402和SrcTyr-416的磷酸化.4.慢性锂盐对PSD-95介导的Pyk2与NR2A相互作用的影响;用ant i-NR2A抗体免疫沉淀,anti-p-Pyk2抗体免疫印迹,发现脑缺血/再灌增强p-Pyk2与NR2A的相互作用,而且再灌注6小时为最高峰.研究结果表明脑缺血/再灌增强Pyk2和Src的磷酸化以及PSD-95介导的Pyk2与NR2A的相互作用,慢性锂盐对Pyk2和NR2A酪氨酸磷酸化的抑制以及对NR2A-PSD-95-Src/Fyn三元复合物和PSD-95介导的Pyk2与NR2A的相互作用的抑制,很可能导致NMDA受体的失活和促成了锂盐拮抗兴奋毒性的神经保护作用.
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