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背景:神经母细胞瘤是儿童最常见的颅外实体肿瘤,而新生血管的形成是实体瘤生长的关键。目前治疗肿瘤的各种药物主要是针对肿瘤细胞本身进行的,但恶性肿瘤生长的血管依赖性提示,通过抑制肿瘤新生血管的形成可以阻止肿瘤的生长。血管内皮生长因子(vascular endothelial growthfactor,VEGF)是高度特异性的血管内皮细胞有丝分裂因子,可作用于血管内皮细胞,促进内皮细胞增殖迁移及血管网的形成,增加血管通透性,从而成为目前抗血管治疗的重要靶向。文献报道,VEGF在人神经母细胞瘤及其细胞系中呈现高表达。ASODN技术是一种可以选择性和特异性地阻断目的基因表达的技术,是基因治疗的重要组成部分。由于它设计容易、合成简单、样式多样、具有高度的靶异性(通过碱基互补原理)、较强的局部性和针对性,因而可以设计针对VEGF基因的ASODN抑制其超量表达。目的:研究VEGF ASODN转染对神经母细胞瘤LA-N-5细胞VEGF基因mRNA表达的影响以及对瘤细胞增殖、分化的影响。方法:1.采用CY-3红色荧光标记的VEGF寡核苷酸确定LipofectamineTM2000介导下VEGF寡核苷酸的转染条件及转染效率:2.运用LipofectamineTM2000介导的VEGF ASODN和SODN转染神经母细胞瘤细胞LA-N-5,半定量RT-PCR检测各组细胞VEGF165和VEGF121mRNA转染前后不同时间的表达变化;3.MTT法测定转染后各组细胞的生长曲线及抑制率。实验分为ASODN、ASODN+ LipofectamineTM2000、SODN、SODN+LipofectamineTM2000、LipofectamineTM2000和control组共6组。结果:1.寡核苷酸:LipofectamineTM2000体积比为2.5:1时转染效率最高,可达73.94±5.62%(P<0.05);2.半定量RT-PCR检测结果显示在72小时VECF165和VEGF121mRNA的表达ASODN组为0.346±0.029和0.227±0.036,ASODN+LipofectamineTM2000组为0.275±0.035和0.165±0.017,ASODN组及ASODN+LipofectamineTM2000组都能显著抑制VEGFmRNA的表达,ASODN+LipofectamineTM2000组抑制作用比ASODN组更强(P<0.05);3.在转染后0、12、24、36、48、60、72小时用MTT法检测瘤细胞增殖情况的变化,ASODN组和ASODN+LipofectamineTM2000组能显著抑制细胞增殖,于第48小时抑制率最高,达39.92±2.74%及55.80±2.52%,且ASODN+LipofectamineTM2000组对细胞增殖的抑制作用较ASODN组更为明显(P<0.05)。SODN组、SODN+LipofectamineTM2000组和control组比较对LA-N-5细胞增殖的影响无显著差异(P>0.05)。结论:1.寡核苷酸与LipofectamineTM2000体积比在2.5:1时转染效率可以达到73.94%。2.VEGF SODN不能抑制VEGF mRNA的表达,也不能抑制LA-N-5细胞的增殖和分化。3.VEGF ASODN可抑制神经母细胞瘤LA-N-5细胞VEGF在mRNA水平的表达,且ASODN+LipofectamineTM2000的效果优于ASODN,抑制效果在转染后72小时最大,达到72.50%和79.38%。4.VEGF ASODN能抑制神经母细胞瘤LA-N-5细胞的增殖和分化,LipofectamineTM2000能明显增强VEGF ASODN的抑制效果。抑制效果在转染后48小时最大,达到55.80%。