大鼠C6脑胶质瘤3.0T MR-DTI及瘤周水肿浸润组织FA值与AQP1的相关性研究

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第一部分Wistar大鼠C6脑胶质瘤模型的建立目的:建立稳定可靠的Wistar大鼠C6脑胶质瘤晚期阶段模型。材料和方法:1、C6细胞在含10%FBS、1%青链霉素混合液的RPMI-1640完全培养基中,置于37℃、5%CO2培养箱中培养,胰酶消化、终止,采集对数生长期的C6细胞计数,检测细胞活性,加完全培养基调整浓度。2、采用随机数字表将22只Wistar大鼠分成实验组17只,假手术组(对照组)5只。通过立体定向技术,将浓度大于1.0x106.10μ1的C6细胞接种至实验组大鼠右侧尾状核区,假手术组大鼠在相同部位注射完全培养基。3、肿瘤细胞接种后约3-4周对相应大鼠进行磁共振扫描和病理观察。结果:1、17只大鼠接种肿瘤细胞,1只死于术后约1h,1只于接种后15日不明原因死亡(随后病理证实有肿瘤形成),其余15只肿瘤细胞接种大鼠在随后的MRI和病理检查中均证实有肿瘤形成,接种成功率100%。假手术组5只大鼠均存活,且未见肿瘤形成。2、术后经磁共振及实验结束后的病理证实肿瘤细胞接种后约3-4周存在瘤周水肿和/或肿瘤细胞浸润。结论:Wistar大鼠C6脑胶质瘤模型稳定可靠,生长迅速,接种成功率高,肿瘤细胞接种后约3-4周,可满足瘤周水肿和/或肿瘤浸润实验要求。第二部分大鼠C6脑胶质瘤在体3.0T磁共振张量成像研究目的:探讨3.0T磁共振张量成像在Wistar大鼠C6胶质瘤肿瘤区和对侧正常脑实质区的各向异性分数(FA)值及平均弥散系数(MD)值,并比较两种不同的方法选取感兴趣区(ROI)对测量结果的影响。材料和方法:采用随机数字表将22只Wistar大鼠分成实验组17只,假手术组(对照组)5只。通过立体定向技术,将浓度大于1.0x106/10μ1的C6细胞接种至实验组大鼠右侧尾状核区,假手术组大鼠在相同部位注射完全培养基。肿瘤细胞接种后约3-4周,利用3.0T高场强医用磁共振扫描仪,大鼠专用线圈对大鼠C6胶质瘤模型行常规MRI、DT工、T1WI及SAG T1-3D-bravo增强检查,结合T2WI、FLAIR、T1WI及SAGT1-3D-bravo增强确定肿瘤与水肿区,借助Function Tool软件对DTI数据后处理,避开出血、坏死区,选取多个即3个等大(2mmm2,9pix)ROI和单个较大ROI,获得肿瘤实质和对侧正常脑实质区的FA及MD值。结果:15只成瘤大鼠中,肿瘤区和对侧正常脑实质区3个等大ROI FA平均值分别为(0.1075±0.02)和(0.312±0.024),而3个等大ROIMD值分别为(0.944±0.029)×10-3mm2/s和(0.808±0.036)×10-3mm2/s,两组结果经两样本t检验显示差别均有统计学意义(P<0.05)。肿瘤区和对侧正常脑实质区单个较大ROI FA平均值分为(0.118±0.039)和(0.310±0.052),而单个较大ROI MD平均值分别为(0.941±0.047)×10-3mm2/s和(0.806±0.043)×10-3mm2/s,两组结果经两样本t检验显示差别亦有统计学意义(P<0.05)。两种不同的方法选取肿瘤区ROI获得的FA值经配对t检验显示有统计学意义(P<0.05),而MD值间无统计学意义(P>0.05)。结论:用临床3.0T MRI行大鼠C6胶质瘤DTI检查切实可行,通过测量肿瘤区、对侧正常脑实质区FA及MD值,为以后的科研工作提供了有用的参考。方法学上,本研究发现两种不同的方法选取ROI对FA值测量结果有影响,而对MD值测量结果无明显影响。第三部分AQP1在鼠脑C6胶质瘤瘤周水肿浸润组织中的表达与FA值的相关性研究目的:研究Wistar大鼠C6脑胶质瘤瘤周水肿浸润组织的磁共振弥散张量成像(MR-DTI)的特征,并与免疫组织化学水通道蛋白1(AQP1)对照,探讨AQP1在胶质瘤瘤周水肿浸润组织中的表达与MR-DTI参数部分各向异性分数(FA)的相关性。材料与方法:采用随机数字表将22只Wistar大鼠分成实验组17只,假手术组(对照组)5只。通过立体定向技术,将浓度大于1.0×106/10ul的C6细胞接种至实验组大鼠右侧尾状核区,假手术组大鼠在相同部位注射完全培养基。肿瘤细胞接种后约3~4周,利用3.0T高场强医用磁共振扫描仪,大鼠专用线圈对大鼠C6胶质瘤模型行常规MRI、DTI、FLAIR、T1WI及SAG T1-3D-bravo增强检查,结合T2WI、FLAIR.T1WI及SAG T1-3D-bravo增强确定肿瘤与水肿区,借助Function Tool软件对DTI数据后处理,避开出血、坏死等影响结果的区域,选取多个即3个等大(2mm2,9pix)ROI,获得相应部位的FA值。设肿瘤对侧正常脑组织为内对照。MRI扫描完成后立即行4%的多聚甲醛灌注固定全脑,之后过量1%的戊巴比妥钠处死大鼠取全脑固定,选取与DTI肿瘤最大层面相对应的瘤周水肿区脑组织做连续冠状切片,进行HE染色和AQP1抗体免疫组织化学检查。Pearson相关分析法检测FA值和相应部位的AQPl阳性表达的IOD值的相关性,计算相关系数,并进行t检验,以P<0.05为有统计学意义。结果:15只成瘤大鼠中,瘤周水肿区约3-4周3个等大ROI FA平均值为(0.204±0.036),较对侧正常脑组织多个ROI FA平均值(0.310±0.027)降低,不过没有瘤体降低明显,两组结果经两样本t检验显示差别有统计学意义(P<0.05)。Pearson相关分析显示,肿瘤水肿浸润组织的FA值与AQP1阳性表达IOD值之间存在负相关(r=-0.81,P<0.05)。结论:Wistar大鼠C6脑胶质瘤瘤周水肿浸润组织MR-DTI参数FA值与AQP1之间存在负相关,随着AQP1阳性表达程度的增高,FA值降低。
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