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目的研究不同浓度门冬酰胺酶(L-Asp)对急性T淋巴细胞白血病细胞(Jurkat细胞株)、人慢性髓系白血病细胞(K562细胞株)的ATF4、门冬酰胺合成酶(ASNS)基因相对表达量的影响以及ATF4、ASNS基因与L-Asp耐药的关系。方法1.取生长良好且处于对数期的Jurkat细胞、K562细胞,分别用不同终浓度的L-Asp进行处理37℃5%CO2条件下培养24h后用CCK-8试剂盒检测Jurkat细胞、K562细胞的增殖抑制率。2.取生长良好且处于对数期的K562细胞,根据检测的半数抑制率(IC50),将细胞分为A-F六组(A为对照组以及B-F实验组),A组为正常条件下培养,B-F组分别用终浓度为1U/ml、10U/ml、100U/ml、300U/ml、500U/ml的L-Asp处理,37℃5%CO2条件下培养24h、48h后,通过实时荧光定量PCR技术分别检测ATF4m RNA、ASNSm RNA的相对表达量。3.取生长良好且处于对数期的Jurkat细胞,根据检测的半数抑制率(IC50),将Jurkat细胞分为a-f六组(a为对照组以及b-f实验组),a组为正常条件下培养,b-f组分别用终浓度为0.02U/ml、0.2U/ml、2.0U/ml、20U/ml、200U/ml的L-Asp处理,37℃5%CO2条件下培养24h、48h、72h后,通过实时荧光定量PCR技术分别检测ATF4m RNA、ASNSm RNA的相对表达量。结果1.细胞的生长及形态变化对照组Jurkat细胞悬浮生长、形态完整、细胞膜光滑、圆形透亮、葡萄串样、密度较大。实验组随着L-Asp剂量的增大,细胞皱缩、透亮度降低、排列紊乱、密度减少。对照组K562细胞单个悬浮生长、形态完整、折光性好、密度较大。实验组随着L-Asp剂量的增大,透亮度降低、细胞皱缩、排列紊乱、密度减少。2.细胞的增殖抑制率Jurkat细胞在L-asp作用下培养24h、48h的IC50值分别为0.22U/ml,0.17U/ml;实验组各组增殖抑制率的比较差异有显著统计学意义(F=895.68,P<0.01),且随着L-Aap浓度的增加,细胞增殖抑制率逐渐升高,各组间比较差异有统计学意义(P<0.05)K562细胞在L-asp作用下培养24h、48h IC50分别为290U/ml,198.7U/ml。实验组各组细胞增殖抑制率的比较差异有统计学意义(F=476.57,P<0.01),且随着L-Aap浓度的增加,细胞增殖抑制率逐渐升高,各组间比较差异有统计学意义(P<0.05)。3.Jurkat细胞ATF4、ASNS基因的相对表达量24小时处理的Jurkat细胞各组ATF4、ASNS基因表达量的比较差异有极显著统计学意义(F=1489.331,P<0.01;F=2062.604,P<0.01)。b、c、d、e、f组随着L-Asp剂量的增大,ATF4、ASNS基因的表达量逐渐升高,各组间比较差异有极显著统计学意义(P值均<0.01);而d、e、f组ATF4、ASNS基因的表达量明显高于b、c组(P<0.01)。48小时Jurkat细胞b、c、d、e、f组ATF4、ASNS基因表达量的比较差异有极显著统计学意义(F=88.257,P<0.01;F=898.237,P<0.01)。b、c、d、e、f组随着L-Asp剂量的增大,ATF4、ASNS基因的表达量逐渐升高,各组间比较差异有统计学意义(P值均<0.05);d、e、f组ATF4基因的表达量明显高于b、c组(P<0.05)。4.K562细胞ATF4、ASNS基因的相对表达量24小时K562细胞B、C、D、E、F各组间ATF4、ASNS基因表达量的比较差异有极显著统计学意义(F=54.351,P<0.01;F=43.744,P<0.01)。B、C、D、E、F组随着L-Asp剂量的增大,ATF4、ASNS基因的表达量逐渐升高,E、F组与B、C、D组比较差异有极显著统计学意义(P值均<0.01);E、F组ATF4、ASNS基因的表达量高于B、C、D组(P<0.05)。48小时K562细胞B、C、D、E、F各组间ATF4、ASNS基因表达量的比较差异有极显著统计学意义(F=68.795,P<0.01;F=42.496,P<0.01)。B、C、D、E、F组随着L-Asp剂量的增大,ATF4、ASNS基因的表达量逐渐升高,各组比较差异有极显著统计学意义(P值均<0.05);E、F组ATF4、ASNS基因的表达量高于B、C、D组(P<0.05)。5.Jurkat细胞、K562细胞ATF4、ASNS基因相关性分析24小时作用下的Jurkat细胞ATF4、ASNS基因显著相关,Pearson相关系数分别0.880;48小时作用下的Jurkat细胞ATF4、ASNS基因显著性相关Pearson相关系数0.890。24小时作用下K562的细胞ATF4、ASNS基因显著相关,Pearson相关系数分别0.942;48小时作用下的Jurkat细胞ATF4、ASNS基因显著性相关Pearson相关系数0.994。结论1.L-Asp抑制Jurkat细胞株的生长,呈浓度依赖性;K652细胞株相对耐药。2.L-Asp能促进Jurkat细胞株、K562细胞株ATF4基因、ASNS基因的表达,呈剂量依赖性,Jurkat细胞在L-Asp剂量为0.2U/ml时相对表达量升高最明显;K562细胞在L-Asp剂量为300U/ml时相对表达量升高最明显。3.ASNSm RNA相对表达量与ATF4m RNA相对表达量正相关,ATF4可作为L-Asp耐药治疗的靶点。4.K562细胞株ATF4m RNA和ASNSm RNA相对表达量低于Jurkat细胞株。5.Jurkat细胞株、K562细胞株48小时ATF4和ASNS的相对表达量均低于24小时的相对表达量。