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目的:
本课题采用高脂饲料联合四环素腹腔注射制备大鼠非酒精性脂肪肝(NAFLD)模型,通过与西药东宝肝泰对照,观察中药消脂护肝胶囊对NAFLD大鼠模型肝匀浆谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-PX)、超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)等的影响,深入阐释消脂护肝胶囊防治NAFLD的作用机制,为研制和开发新药奠定基础。
方法:
健康雄性SD大鼠72只,正常喂养在20±3℃、明暗各12小时的动物实验室内,1周后,按体重分层随机分为6组,分别为空白组、模型组、东宝肝泰组(东宝组)和消脂护肝胶囊高(消高组)、中(消中组)、低(消低组)剂量组,每组12只。空白组予普通饲料喂养,其余5组均予高脂饲料(84%基础饲料+10%猪油+5%蛋黄粉+1%胆固醇)喂养,并于造模第1天腹腔注射四环素15mg/100g鼠重,1周后每6天一次腹腔注射四环素10mg/100g鼠重,共计6次。自造模的第2周起,除空白组外,各组均按1ml/100g·d分别灌服生理盐水及相应药物,每日1次。消脂护肝胶囊高、中、低剂量组分别按0.15g/100g、0.075g/100g、0.0375g/100g剂量灌胃,用量相当于成人用药量的20倍、10倍、5倍;东宝肝泰灌胃剂量为0.06g/100g,用量相当于成人用药量的10倍。每周称鼠重一次,并相应调整用药剂量。第7周(末次腹腔注射后1周)实验结束时处死全部实验动物。方法:隔夜禁食,次日以10%水合氯醛溶液0.3ml/100g鼠重腹腔注射麻醉后,自腹主动脉采血,之后迅速取出肝脏称肝湿重;取肝左叶1块0.5cm×1cm×0.3cm组织置于10%磷酸缓冲甲醛液固定,备作光镜病理切片;再取肝左叶1块500mg制成10%肝匀浆;所采血液室温静置30分钟后分离血清备用。检测并观察各组大鼠:(1)肝匀浆谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-PX)、超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA);(2)血清谷丙转氨酶(ALT)、谷草转氨酶(AST);(3)血清总胆固醇(TC)、甘油三酯(TG);(4)肝组织病理学;(5)肝指数。
结果:
1.与空白组比较:模型组肝指数、血清ALT、AST、TC、TG水平、肝匀浆MDA均有显著升高(P<0.01),肝匀浆GSH-PX、SOD显著降低(P<0.01);病理组织学呈中-重度脂肪变。
2.与模型组比较:各用药组肝指数、肝匀浆MDA、血清ALT、AST、TC、TG均有不同程度下降,消脂护肝胶囊高、中、低剂量组及东宝组肝组织GSH-PX、SOD均有显著升高(P<0.05)。以消脂护肝胶囊高、中剂量组疗效最优(P<0.01),东宝组次之(P<0.05)。
消脂护肝胶囊对非酒精性脂肪肝大鼠GSH-PX、SOD、MDA的影响 3.与东宝组相比:消高组的肝指数、病理组织学改善明显;血清ALT、AST、TC、TG显著降低,肝匀浆MDA显著降低,GSH-PX、SOD显著升高(P<0.01);消中组优于东宝组。
4.与消脂护肝胶囊低剂量组相比,高、中剂量组在降低肝匀浆MDA、升高GSH-PX、SOD方面有明显优势(P<0.01);消脂护肝胶囊高、中剂量组之间比较无显著性差异(P>0.05)。
结论:
1.采用高脂饲料联合四环素腹腔注射可以成功复制大鼠NAFLD模型,造模时间短,成功率高,较接近临床NAFLD的发病机制,是一种较为理想的造模方法。
2.消脂护肝胶囊可有效降低NAFLD模型大鼠的肝指数、血清ALT、AST、TC、TG水平,改善病理组织学变化,具有显著的阻止肝脂肪变的发生与发展的作用;
3.NAFLD的形成和发展与肝匀浆MDA、GSH-PX、SOD水平密切相关。NAFLD的形成和发展与MDA呈正相关,与GSH-PX、SOD呈负相关;
4.消脂护肝胶囊可降低肝组织MDA含量,升高GSH-PX、SOD水平,阻止或减轻氧应激和脂质过氧化反应;这可能是其防治NAFLD的重要机制之一;
5.无论从实验疗效指标(TC、TG、ALT、AST、病理学等)还是从肝匀浆MDA、GSH-PX、SOD调控情况来看,消脂护肝胶囊防治NAFLD的效果均明显优于东宝肝泰对照组;
6.随着剂量的增加,消脂护肝胶囊实验疗效指标、实验观察指标(肝匀浆MDA、GSH-PX、SOD)均获得更明显的改善,说明该药在所选范围内存在一定量效关系。