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蜡梅作为常用的园林植物和木本切花,由于其独特的开花时间和浓郁的花香,具有较高的观赏价值和经济价值,其观赏价值主要取决于花朵的开放情况,为了探索乙烯是否影响蜡梅的花朵开放,本文使用乙烯和1-MCP处理蜡梅花朵,利用RNA-seq技术,探索乙烯对蜡梅花朵的影响及克隆乙烯响应因子基因,为调控蜡梅花朵开放,改善切花品质提供帮助。本研究的主要结果如下:1.在本研究中,提取蜡梅蕾期花朵总RNA,利用高通量Illumina HiSeq4000平台测序,共得到0h样本40264927条clean data、4h样本41064633条clean reads、4hEth样本39230880条clean reads、24h样本41158515条clean reads和24h1-mcp样本40851828条clean reads。用Trinity软件对所有的clean reads进行拼接,共得到了195349个转录本序列,平均长度为919bp。2.将拼接得到的Unigene序列与NR、SwissProt、COG、GO和KEGG等数据库进行比对,其中,共有52352（26.8%）条转录本序列在NCBI非冗余获得了蛋白功能注释信息,发现蜡梅注释序列表现出与葡萄的较高同源性。有8934个转录本序列共被归类到了三个主要GO类别中的53个亚类,大部分的转录本序列被注释到细胞部分、细胞进程、代谢过程、蛋白结合和催化活性。有43391个转录本序列归类到了25个COG分类中,有2926个转录本注释到132个不同的代谢途径中。3.通过蜡梅花朵不同处理的转录组测序结果,对0hvs4h、0hvs24h、0hvs Eth4h和0hvs1-mcp24h的差异基因进行了分析,发现显著差异表达基因分别有282、396、293和367个（Log2FC≥2或≤-2;FDR≤0.05）。并且,在0hvs4h的差异基因中,有108个基因显著上调表达,有174个基因显著下调表达;而在0hvsEth4h的差异基因中,有143个基因显著上调表达,有150个基因显著下调表达。在0hvs24h的差异基因中,有127个基因显著上调表达,有168个基因显著下调表达;而在0hvs1-mcp 24h的差异基因中,有191个基因显著上调表达,有176个基因显著下调表达。同时对植物激素信号转导途径相关差异基因分析,发现植物激素信号转导途径相关差异基因显著差异表达,这些差异基因经注释为植物激素受体或植物激素响应基因,如ARF、AUX/IAA、SAUR、CKX、ERF和FBL基因。在本研究中我们获得了蜡梅花发育相关差异基因,包括FPA、VIL、AGL、FLP、BBX基因。同时我们也获得了花色素相关差异基因,包括F3PH、NCED1基因。利用q RT-PCR技术对随机挑选差异表达基因进行检测,表明了转录组测序的准确性和有效性。4.对蜡梅花朵不同处理的转录组测序结果进行转录因子数据分析,共注释得到了94个转录因子家族共35723个转录因子,包括C2H2、C3H、NAC、bHLH、MYB、AP2/ERF等转录因子家族。为了了解转录组数据中差异表达基因转录水平变化,发现0hvs4h、0hvs24h、0hvs Eth 4h和0hvs1-mcp 24h中的差异基因分别注释到144、161、139和199个转录因子,分属于39、47、45和52个转录因子家族。5.从本实验乙烯所诱导的蜡梅转录组数据库中获得AP2/ERF转录因子家族成员基因序列,通过克隆的方法获得了AP2/ERF转录因子CpERF1基因的cDNA全长序列。分析表明该基因cDNA全长852bp,含618bp的开放阅读框,编码205个氨基酸残基,含有保守的AP2结构域,是植物典型的AP2/ERF家族转录因子;该转录因子属于AP2/ERF转录因子家族中的ERF亚族B3组,并且与拟南芥AtERF1（AT3G23240.1）进化关系最近。进一步对CpERF1基因的表达特性进行分析,实时荧光定量PCR显示,CpERF1基因在蜡梅的各组织中都有表达,在成熟叶中表达量最高。而CpERF1基因在花器官不同发育时期的表达中,在盛开期表达量最高。6.实验成功构建植物超表达载体pCAMBIA2301g-CpERF1,以农杆菌GV3101为载体,用花序侵染法转化拟南芥,用Ka抗性培养基筛选得到转CpERF1基因的九个株系的不纯和转基因单株。