植物精油对腐食酪螨和伯氏生卡螨的作用研究

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腐食酪螨和伯氏生卡螨是世界性分布的粉螨种类,它们不仅危害各种储藏物,还是食用菌生产和经济昆虫饲养的重要害螨。合成农药在螨类防治中应用广泛,但长期反复使用易使害螨产生抗性、伤害非靶标生物,污染环境。因此,需要寻求新的防治策略。植物精油对环境友好、易降解,对非靶标生物安全,符合绿色无公害农业发展需要。本文从81种植物精油中筛选出肉桂精油和丁香精油两种高杀螨活性品种,通过生物测定研究了它们对两种害螨的毒力,并通过螨体形态变化和酶活性变化趋势初步探索其作用机理,以期为二者开发利用提供理论基础。本文主要研究结果如下:  1.对81种植物精油杀螨活性筛选  通过熏蒸和触杀同时作用的方法测定了81种植物精油在不同浓度时对腐食酪螨和伯氏生卡螨的杀灭活性;并在施用浓度是螨虫的“4~32倍”的条件下测试了这 81 种精油对腐食酪螨和伯氏生卡螨严重危害的经济昆虫中华真地鳖的毒性。从中筛选出具有杀螨活性的植物精油品种24种,具有杀虫活性的植物精油品种20种。通过比较排除,得到18种仅显示出杀螨活性而对中华真地鳖未见毒害的精油品种。其中肉桂精油和丁香精油在测试范围内毒性最强,杀灭率均为100%。  2.肉桂精油对腐食酪螨和伯氏生卡螨的作用  采用熏蒸和触杀同时作用的方法测试肉桂精油和肉桂醛对腐食酪螨和伯氏生卡螨的毒力,结果显示肉桂精油对腐食酪螨LC50是1.06 μg/cm2,毒力分别是苯甲酸苄酯和和邻苯二甲酸二丁酯的 9.08 倍和 33.76 倍。肉桂醛对腐食酪螨的LC50是1.36 μg/cm2,分别是两种农药的7.08倍和26.31倍。肉桂精油对伯氏生卡螨的LC50是2.18 μg/cm2,分别是两种农药的8.63倍和31.63倍。肉桂醛对伯氏生卡螨的LC50是2.45 μg/cm2,分别是两种农药的7.68倍和28.15倍。肉桂醛对伯氏生卡螨的杀灭效果远优于两种对照农药。确定肉桂醛是肉桂精油杀螨活性成分。  采用密闭熏蒸实验和半开放触杀试验测试肉桂醛对腐食酪螨和伯氏生卡螨的作用方式,结果显示密闭熏蒸的效果明显优于半开放触杀的效果,因此,肉桂醛是通过蒸汽相对两种害螨起作用。  熏蒸法测定肉桂醛和对照农药苯甲酸苄酯对腐食酪螨和伯氏生卡螨卵的 24 h 毒力表明,肉桂醛对腐食酪螨卵 LC50是 13.33 μg/cm2,毒力是苯甲酸苄酯的14.79倍;对伯氏生卡螨卵的LC50是18.10 μg/cm2,毒力是苯甲酸苄酯的18.51倍。肉桂醛对两种螨卵的杀灭效果远优于对照农药。  在封闭系统和开放系统中分别测试了不同浓度的肉桂醛对腐食酪螨和伯氏生卡螨的24 h驱避作用。肉桂醛在浓度为2.46μg/cm3时,在封闭系统和开放系统中对腐食酪螨驱避率分别为77.67%和18.67%。二者差异显著(P<0.05)。肉桂醛在浓度为4.92 μg/cm3时,在封闭系统和开放系统中对腐食酪螨驱避率分别为89.25%和21.65%。二者差异显著(P<0.05)。且驱避率呈现浓度依赖性。  3.丁香精油对腐食酪螨和伯氏生卡螨的作用  采用熏蒸和触杀同时作用的方法测试丁香精油和丁香酚对腐食酪螨和伯氏生卡螨的毒力,结果显示丁香精油对腐食酪螨LC50是4.82 μg/cm2,毒力分别是苯甲酸苄酯和邻苯二甲酸二丁酯的2.22倍和7.42倍。丁香酚对腐食酪螨的LC50是4.49μg/cm2,分别是两种农药的2.14倍和7.97倍。丁香精油对伯氏生卡螨的LC50是9.36μg/cm2,分别是两种农药的2.01倍和7.37倍。丁香酚对伯氏生卡螨的LC50是8.16μg/cm2,分别是两种农药的2.31倍和8.45倍。丁香酚对伯氏生卡螨的杀灭效果远优于两种对照农药。确定丁香酚是丁香精油杀螨活性成分。  采用密闭熏蒸实验和半开放触杀试验测试丁香酚对腐食酪螨和伯氏生卡螨的作用方式,结果显示密闭熏蒸的效果明显优于半开放触杀的效果,因此,丁香酚是通过蒸汽相对两种害螨起作用。  熏法测定丁香酚和对照农药苯甲酸苄酯对腐食酪螨和伯氏生卡螨卵的 24 h熏蒸毒力表明,丁香酚对腐食酪螨卵LC50是32.78μg/cm2,毒力是苯甲酸苄酯的6.01倍;对伯氏生卡螨的LC50是38.89μg/cm2,毒力是苯甲酸苄酯的8.62倍。丁香酚对两种害螨卵的杀灭效果远优于对照农药。  在封闭系统和开放系统中分别测试了不同浓度的丁香酚对腐食酪螨和伯氏生卡螨的24h驱避作用。丁香酚在浓度为4.92 μg/cm3时,在封闭系统和开放系统中对腐食酪螨驱避率分别为85.84%和21.53%。二者差异显著(P<0.05)。丁香酚在浓度为9.84 μg/cm3时,在封闭系统和开放系统中对伯氏生卡螨的驱避率分别为75.69%和18.86%。二者差异显著(P<0.05)。且驱避率呈现浓度依赖性。  4.对螨体表面和组织细胞形态的影响  体式显微镜图像显示,肉桂醛处理腐食酪螨和伯氏生卡螨成螨后体色黄,对照无色透明。肉桂醛处理后两种螨卵色黄、皱缩,对照组无色透明、饱满。扫描电镜图像显示,处理后的腐食酪螨和伯氏生卡螨体壁凹凸不平,对照组体壁光滑。透射电镜图像显示,处理后的伯氏生卡螨体壁表皮层纹理疏松,表皮层有絮状附着,该区域未见I型体腔细胞,体细胞有细胞核,但核仁与染色质模糊不清,其它细胞器呈空泡化不可见;对照组螨体体壁表皮层可见清晰致密的纹理,I型体腔细胞完整清晰,可清晰看到体细胞核内核仁(Nu)、染色质(Ch)、线粒体(M)、粗面内质网(RER)及滑面内质网(SER)等多种细胞器。  5.对螨体内酶的影响  腐食酪螨和伯氏生卡螨受肉桂醛处理后,体内超氧化物歧化酶(SOD)、乙酰胆碱酯酶(AchE)的活力都随时间推移表现为先上升后下降的趋势,但整体上表现为低于对照,说明肉桂醛对两种螨体内SOD和AchE的活性具抑制作用。两种螨体内过氧化氢酶(CAT)和一氧化氮合酶(NOS)的活力都随时间推移表现为先上升后下降的趋势,但整体上表现为高于对照,说明肉桂醛对两种螨体内CAT 和 NOS 活性具有促进作用。腐食酪螨谷胱甘肽-S 转移酶(GSTs)的活力随时间推移主要表现为上升趋势,伯氏生卡螨GSTs的活力随时间推移表现为先上升后下降的趋势,但整体上两种螨GSTs的活性表现为处理组高于对照,说明肉桂醛对两种螨体内GSTs活性具有促进作用。  本研究明确了肉桂精油及其活性成分肉桂醛和丁香精油及其活性成分丁香酚对腐食酪螨和伯氏生卡螨成螨及卵的毒性、熏蒸杀灭作用和驱避作用,二者均严重影响螨表皮层和主要保护酶活性。研究结果为腐食酪螨和伯氏生卡螨防治以及无公害植物源杀螨剂的开发和利用提供了理论依据。
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