泽漆汤对非小细胞肺癌抑制与免疫调控的机制研究

来源 :上海中医药大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:liangmingming
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目的:  正虚和痰阻是非小细胞肺癌发生的重要病机,故本文从益气化痰法治疗非小细胞肺癌的角度出发,选取为益气化痰的代表方泽漆汤。从药效学角度探讨泽漆汤治疗非小细胞肺癌的作用效果,初步分析其作用机制,以期为中医药治疗非小细胞肺癌提供帮助。  方法:  体内实验:①构建LLC-luciferase细胞株,更客观地监测小鼠肿瘤生长情况。②构建并优化小鼠肺癌原位模型。③泽漆汤的药效学研究。④泽漆汤与紫杉醇联合用药的药效观察。⑤用流式细胞术检测小鼠体内免疫细胞NK、NKT、T、Treg、MDSC、M2-Mψ含量。  体外实验:取对数生长期的4种非小细胞肺癌细胞株(H1299、H1975、A549、LLC),采用MTT法检测泽漆汤对4种非小细胞肺癌细胞株增殖的影响。采用流式细胞术检测泽漆汤对4种非小细胞肺癌细胞株周期及细胞凋亡的影响。  结果:  体内实验:①在激光共聚焦显微镜下观察到LLC-luciferase细胞株能稳定表达虫萤光素酶(luciferase)。②原位接种LLC-luciferase细胞株的C57BL/6小鼠经解剖观察到肿瘤长在左肺上、活体成像观察到肺部荧光信号、病理切片在正常肺组织中观察到毛线团样肿瘤实体病灶证实肺癌原位模型构建成功。③构建小鼠肺癌原位模型时接种LLC-luciferase细胞株数目为1×105/只。④泽漆汤低剂量组(生药12.87 g/kg)、泽漆汤高剂量组(生药19.305g/kg)同对照组相比,泽漆汤高剂量组在第32天能明显抑制肿瘤大小(P<0.01),且泽漆汤高剂量组在第32天比泽漆汤低剂量组肿瘤小(P<0.05),二者均能延长小鼠生存时间(P<0.05,P<0.001)。⑤泽漆汤组(生药19.305 g/kg)、紫杉醇组(10 mg/kg)、泽漆汤和紫杉醇联合用药组同对照组相比,泽漆汤和紫杉醇联合用药组在第18、25、32天均能抑制小鼠肿瘤生长(P<0.05,P<0.01),泽漆汤组、紫杉醇组在第32天能抑制小鼠肿瘤生长(P<0.05),且泽漆汤和紫杉醇联合用药组明显延长小鼠生存时间(P<0.05)。⑥泽漆汤组(生药19.305 g/kg)和对照组小鼠灌胃21天后,检测脾脏、肿瘤中免疫细胞NK、NKT、T、Treg、MDSC、M2-Mψ含量,泽漆汤组小鼠肿瘤中NK、NKT、CD3+CD8+T比对照组多(P<0.05),MDSC比对照组少(P<0.05),泽漆汤组小鼠脾脏中NK比对照组多(P<0.01)。  体外实验:①细胞增殖MTT实验结果显示泽漆汤能抑制H1299、H1975、A549、LLC细胞增殖(P<0.05,P<0.01,P<0.001),呈剂量依赖性及时间依赖性。②细胞周期实验结果显示泽漆汤能诱导A549细胞周期阻滞在G2/M期(P<0.05,P<0.01),呈剂量依赖性,而对H1299、H1975、LLC无明显周期阻滞。③细胞凋亡实验结果显示泽漆汤能促进H1299、H1975、A549、LLC细胞凋亡(P<0.05,P<0.01,P<0.001),呈剂量依赖性。  结论:  泽漆汤能抑制原位接种LLC-luciferase细胞C57BL/6小鼠肿瘤生长,呈剂量依赖性,并延长小鼠生存时间,且同紫杉醇联用有协同增效之功。泽漆汤可上调小鼠肿瘤内NK、NKT、CD3+CD8+T,下调小鼠肿瘤内MDSC,增加小鼠脾脏NK细胞。泽漆汤能抑制H1299、H1975、A549、LLC细胞增殖、诱导细胞凋亡,并将A549细胞周期阻滞在G2/M期。故泽漆汤既能抑制肿瘤生长,又能增强小鼠免疫力,延长小鼠生存期,多靶点共同作用,达到益气化痰、扶正祛邪的目的。
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