背景：脾气虚证（Syndrome of Deficiency of Spleen-Qi，SDSQ）是中医脏腑病辨证中的基本证型。主要临床表现为食欲减退，食后或午后腹胀,大便塘薄，腹胀、纳呆、便塘等，多由于饮食不节、劳倦过度、过食生冷、久病耗气所引起。经常见于中医的腹痛、下泻、水肿、痰饮、哮喘、痿证、胃脘痛、小儿疳积证，以及西医的慢性胃肠炎、胃肠溃疡、慢性支气管炎、支气管哮喘等疾病。近年来研究发现，脾气虚证患者存在明显胃肠运动功能障碍。临床工作中还发现，针刺足三里、天枢穴可有效治疗脾气虚证，但详细的机理还不完全清楚。目的：以苦寒泄泻、耗气破气法致脾气虚证大鼠模型为研究对象，观察脾气虚证大鼠小肠胆碱能神经和平滑肌细胞的形态学损伤和针刺足三里、天枢穴治疗后的变化。探讨脾气虚证致胃肠运动障碍的本质和针刺足三里、天枢穴治疗脾气虚证的机理。方法：60只健康成年Wistar大鼠，雌雄各半，体重200~250g，随机分为对照组（10只）、SDSQ组（10只）、自然恢复组（10只）、针刺足三里穴治疗组（足三里组）（10只）、针刺天枢穴治疗组（天枢组）（10只）、针刺足三里和天枢穴治疗组（足三里和天枢组）（10只）。对照组每只大鼠灌服4ml蒸馏水，饮食不限，饲养30天；SDSQ组、足三里治疗组、天枢治疗组、足三里和天枢治疗组和自然恢复组每只大鼠给予方①和方②交替灌胃[①：大黄、厚朴、枳实按（2:1:1）制成200%浓度煎剂；②：广豆根、旋覆花、槟榔（3：1：1）制成200%浓度煎剂]，造模前20天，3次/天，后15天，4次/天，每次4ml。造模成功后，各治疗组分别给予①电针足三里穴；②电针天枢穴；③同时电针足三里穴+天枢穴（华佗牌HANS-200E型针刺治疗仪以0.1mA初始电流刺激逐渐增强至0.4mA，每日晨7时至10时），治疗2周；自然恢复组，造模成功后常规饲养4周。取各组存活大鼠近幽门环处10cm的上段小肠，制作肠平滑肌肌层的全厚组织标本。①HE染色：将标本行石蜡包埋、切片，行HE染色，显微镜下观察小肠组织的形态学改变；②免疫荧光染色：用囊泡状乙酰胆碱转运体（VAChT）抗体进行小肠胆碱能神经纤维的单标记荧光染色；用PGP9.5抗体和α-actin抗体进行小肠平滑肌细胞的双标记荧光染色。应用激光扫描共聚焦显微镜检测、分析图像，观察各组大鼠小肠神经和平滑肌细胞网络的形态结构；③Tunel凋亡检测法：利用Tunel凋亡检测法观察和分析各组大鼠小肠平滑肌细胞的凋亡数量。结果：1.大体标本与对照组相比，SDSQ组大鼠胃肠极度扩张，具有明显的胃肠道阻塞的症状；恢复组较SDSQ组胃肠扩张稍缓解，胃肠梗阻征象明显；足三里治疗组胃肠扩张、梗阻征象较SDSQ组和恢复组明显减轻；天枢治疗组胃肠扩张、梗阻征象较SDSQ组和恢复组明显减轻；足三里和天枢治疗组胃肠扩张、梗阻征象较SDSQ组和恢复组、天枢组、足三里组明显减轻。2. HE染色对照组：小肠粘膜完整无缺损、无破裂，肠绒毛完整，肠腺结构清晰，肌层细胞分布均匀。SDSQ组：小肠粘膜多处缺损或破裂，上皮细胞有脱落迹象，肌层组织结构欠清晰，绒毛出现水肿。恢复组：小肠粘膜偶尔破裂，肌层组织结构尚清晰，小肠绒毛水肿仍较明显，伴有炎性细胞浸润，部分肠腺轻度充血。足三里组：小肠粘膜偶有破裂，上皮细胞分布均匀，肌层组织结构较清晰，绒毛轻度水肿。天枢组：小肠粘膜鲜有破裂，肌层组织结构清晰，绒毛水肿不明显。足三里和天枢组：小肠粘膜基本完整，上皮细胞均匀分布，肌层组织结构清晰，绒毛水肿较病理组明显减轻，排列较整齐，未见明显缩短、脱落，细胞核数量有所减少，炎性细胞浸润极少，部分肠腺可见有轻度充血。3.共聚焦显微镜检测免疫荧光①肠神经：与对照组相比，SDSQ组大鼠小肠乙酰胆碱（cholinergic nerves，Ach）神经纤维数目和积分光密度（integraloptical density，IOD）值明显减少（P<0.01），肠神经数量明显减少，神经网络结构紊乱且遭到明显的破坏，相互之间连接明显减少。恢复组大鼠小肠Ach神经纤维数目较SDSQ组有所增加（P<0.01），荧光IOD值有所恢复（P<0.01），神经网络结构紊乱，彼此连接减少，完整的网络样结构受到破坏。足三里治疗组和天枢治疗组大鼠小肠Ach神经纤维数目较恢复组明显增多（P<0.01），神经的网络状结构得到基本维持，在细胞的荧光IOD值也明显增加，显著高于恢复组。（P<0.01)。足三里和天枢治疗组大鼠小肠神经和Ach神经纤维数目较恢复组明显增多（P<0.01），较足三里、天枢单一治疗组，神经网络状结构更加清晰、完整，细胞的IOD值比恢复组明显增加（P<0.01)。②小肠平滑肌网络结构：与对照组相比，SDSQ组大鼠小肠平滑肌细胞的数目明显减少，小肠神经的IOD值明显降低（P<0.01)，神经和平滑肌之间连接疏松、网络结构遭到明显破坏；恢复组大鼠小肠神经数量较SDSQ组稍有增多，小肠平滑肌数量也略有增多，但不明显。小肠神经与平滑肌之间连接较致密，局部偶尔可见完整的神经-平滑肌网络结构，小肠神经IOD值明显增加（P<0.01)。足三里治疗组与恢复组相比，其小肠神经及平滑肌数量有所增加，小肠神经和平滑肌间的连接较紧密，网络样结构比较清晰，小肠神经的IOD值明显增加（P<0.01)。天枢治疗组与恢复组比较，小肠神经及平滑肌的数量有所增加，二者之间的相互连接也更加紧密，小肠神经-平滑肌网络样结构较清晰，小肠神经IOD值明显增加（P<0.01)。与足三里治疗组相比，小肠神经和平滑肌数量略有增加但不明显，神经与平滑肌之间的连接紧密程度、网络结构的损伤程度及IOD值未见明显差异。足三里和天枢治疗组与恢复组相比，小肠神经和平滑肌细胞数量明显增加，二者之间的连接紧密，可见清晰的神经-平滑肌网络样结构，IOD值明显增加（P<0.01)。与足三里、天枢单一因素治疗组相比，其小肠神经和平滑肌的数量明显增加，小肠神经与平滑肌的相互连接紧密，二者构成的网络结构清晰可见，IOD值明显增加（P<0.01)。③平滑肌细胞凋亡计数：与对照组相比，SDSQ组大鼠细胞凋亡数量明显增多（P<0.01），完整的网络样结构消失。恢复组大鼠细胞凋亡数量较SDSQ组明显减少（P<0.01），但较各治疗组仍较多（P<0.01）。足三里治疗组大鼠细胞凋亡数量比恢复组明显减少（P<0.01）；天枢治疗组大鼠细胞凋亡数量比恢复组明显减少（P<0.01）。足三里治疗组和天枢穴治疗组较足三里治疗组无显著差异（P＞0.01）。足三里和天枢治疗组大鼠细胞凋亡数量比恢复组明显减少（P<0.01）。结论：①苦寒泄泻、耗气破气所致SDSQ组大鼠胃肠极度扩张，具有明显的胃肠道阻塞的症状；针刺足三里治疗和针刺天枢的治疗能缓解其胃肠梗阻症状，但效果较差；针刺足三里和天枢穴治疗能够有效、明显地改善胃肠麻痹梗阻征象。②SDSQ状态下，小肠组织受到明显的损伤，正常的生理结构遭到破坏，大量炎性细胞浸润。而这些病理改变必然导致肠道功能的障碍，通过针刺足三里和天枢穴治疗能有效修复小肠组织的损伤，抑制炎性细胞浸润，从而起到保护小肠组织正常结构，促进胃肠动力恢复的作用。③SDSQ胃肠动力障碍的发生与小肠神经的损伤、神经-平滑肌网络结构的破坏和平滑肌细胞凋亡数量的增加密切相关；针刺足三里和天枢穴可以修复小肠神经的形态结构，保护神经-平滑肌网络，抑制平滑肌细胞凋亡，促进胃肠动力的恢复。④SDSQ时，兴奋性神经Ach神经纤维的数量明显减少，神经之间的相互连接遭到严重破坏，针刺足三里和天枢穴可以明显减少神经损伤，保持小肠神经的正常结构，从而达到修复神经损伤的目的，促进胃肠动力的恢复。