吴门降压膏方临证经验总结及其干预自噬影响高血压病心肌肥厚的研究

来源 :南京中医药大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:chongzimm
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目的:应用中医传承辅助平台整理吴门医派名中医赵笑东主任临床降压膏方处方,总结分析其膏方治疗高血压的治则治法、遣方规律和用药特点等,更好地传承吴门中医的膏方特色,指导临床。从细胞、分子、蛋白质水平观察降压膏方对AngⅡ诱导的心肌细胞肥大和自噬的影响,研究和探讨降压膏方调控自噬抑制高血压性心肌肥厚的作用和机制。方法:1.收集整理赵笑东主任2018年01月01日至2020年12月31日膏方门诊的高血压患者就诊处方,统一规范中药名称、性味、归经后录入中医传承辅助平台系统(V2.5),统计分析膏方中药物使用频次及性味归经特点,基于关联规则分析和复杂系统熵聚类分析对数据系统归纳整理。根据数据结果归纳总结赵主任降压膏方临证经验。2.以AngⅡ诱导H9C2心肌细胞肥大建立高血压心肌肥厚模型,使用降压膏方含药血清处理后,将细胞随机分为6组:空白对照组(CON),模型组(ANG Ⅱ),低浓度膏方含药血清组(ANG Ⅱ-L),中浓度膏方含药血清组(ANG Ⅱ-M),高浓度膏方含药血清组(ANG Ⅱ-H),厄贝沙坦含药血清组(ANG Ⅱ-Ⅰ)。通过CCK-8法检测药物处理对心肌细胞活性的影响。采用鬼笔环肽染色标记法检测各组心肌细胞面积变化。实时荧光定量PCR测定细胞肥厚基因ANP、BNP、β-MHC mRNA的表达情况。Western Blot检测心肌细胞内自噬相关蛋白Beclin1、LC3、p62及相关通路蛋白mTOR的相对表达量变化。结果:1.临床数据分析:运用中医传承辅助平台系统(V2.5)对临床172张降压膏方进行归纳分析,得出方中所含药物多以味甘、性温、归肝肾经为主;基于用药模式和关联规则分析,得到药物关联规则21条,其中关联度较高的药对有天麻-山茱萸、山茱萸-泽泻、山茱萸-砂仁、三七-山茱萸等;基于复杂系统熵聚类分析,得到核心药物组合26对,新处方13张。2.细胞实验方面:①与空白对照组相比,模型组心肌细胞表面积明显增大(P<0.01);与模型组相比,膏方含药血清组可以抑制细胞面积增大(P<0.05),且高浓度膏方含药血清组更为明显(P<0.01)。②与空白对照组相比,AngⅡ可引起心肌肥大,细胞蛋白含量增加,其ANP、BNP、β-MHC mRNA表达上调(P<0.05);与模型组相比,膏方含药血清组可以抑制细胞肥大基因mRNA表达的增高(P<0.05),且高浓度膏方含药血清组更为明显(P<0.01)。③与空白对照组相比,模型组AngⅡ明显促进Beclin1、LC3-Ⅱ的表达,抑制p62、mTOR的表达;与模型组相比,膏方含药血清组Beclin1、LC3-Ⅱ蛋白表达下降,p62、mTOR蛋白表达上升,差异具有统计学意义(P<0.01);且高浓度膏方含药血清组与厄贝沙坦含药血清组相比无统计学差异(P>0.05)。结论:1.基于数据挖掘得出,赵主任临床降压膏方用药多以味甘、性温、归肝肾经为主,临床诊治以“补治同施”为则,长于滋肾平肝,泄浊化瘀;遣方主张“以衡为要”,以阴阳平衡、气血调和、顾护心脾为主;用药主张“主次并用,动静结合”。与目前临床吴门膏方治疗高血压诊疗思路相契合,又有其特色。2.AngⅡ能诱导心肌细胞肥大,激活细胞自噬。降压膏方干预后能有效抑制AngⅡ诱导的心肌肥厚。降压膏方干预后能下调AngⅡ诱导的心肌细胞中自噬蛋白Belin1、LC3表达,上调p62、mTOR表达,从而抑制心肌细胞肥大的自噬。因此推测降压膏方抑制高血压心肌肥厚机制可能与其调控自噬有关。
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