抗小分子核糖体失活蛋白Trichokirin-S1单克隆抗体和抗HBsAg PreS1单链抗体的研究

来源 :中国科学院上海生命科学研究院生物化学与细胞生物学研究所 中国科学院上海生命科学研究院 | 被引量 : 0次 | 上传用户:seasonlao
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  本论文由抗Trichokirin-S1单克隆抗体和抗HBSAgpreS1抗原scFv的制备、性质及应用两部分组成。   本文采用单克隆抗体技术筛选到两株能分泌高特异性的抗Trichokirin-S1单克隆抗体的杂交瘤细胞株1F11和2A5。单克隆抗体1F11和2A5亚型分别为IgG2a和IgG1。用非竞争ELISA法测得其亲和常数分别为2.3×108L/mol和2.8×108L/mol。用单抗2A5制备的免疫亲和凝胶,从100g栝楼种籽中可纯化到8.6mgTrichokirin-S1,是常规方法的3倍以上。单抗1F11和2A5均可成功地用于Trichokirin-S1的westernblot分析。   本文采用RT-PCR技术从本组已建立的抗preS1(21-47)的杂交瘤细胞125E11中克隆到了Vh和V1基因。序列分析表明,Vh属VH10family,subgroupШD亚类,Vl属Vκfamily,subgroupⅠ亚类。基因序列已递交GenBank,序列号分别为AY738761,AY738760。在此基础上构建了抗preS1(21-47)单链抗体的原核表达质粒pET32scFv,并在宿主菌BL21(DE3)内成功地表达了125E11scFv,表达产物为包涵体。运用pH、尿素双重梯度的SephacrylS-100凝胶过滤法对包涵体进行了复性。复性率达11﹪,从1升培液的菌体中可获得2.7mg复性的125E11scFv。复性的scFv具有很好的特异性,其对preS1(21-47)抗原的亲和力约为天然125E11单抗的六十分之一。
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