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γ干扰素是一种由T淋巴细胞在促有丝分裂源和抗原刺激下产生的细胞因子,它具有高效抗病毒和免疫调节作用,有广阔的应用前景。
本研究根据Genbank中禽γ干扰素(interferon-γ)基因cDNA序列设计简并引物,采用RT-PCR的方法成功的从贵妃鸡和番鸭脾淋巴细胞中扩增到IFN-γ基因cDNA片段,并将其克隆到pMD18-T载体中进行序列测定,结果表明:两种禽IFN-γ基因cDNA长度均为495bp,编码164个氨基酸和一个终止密码子。它们与Genbank中红原鸡和绿头鸭IFN-γ基因cDNA核苷酸序列同源性分别为99.8%和98.0%,与Genbank其它6个物种(人、鼠、猪、马、牛和犬)的cDNA序列进行比较,发现核苷酸序列同源性在49%~84%之间,氨基酸序列同源性在25%~81%之间,说明不同物种之间IFN-γ基因差异较大。
根据贵妃鸡IFN-γ基因测序结果设计另一对引物,用PCR方法从含有贵妃鸡IFN-γ基因的重组质粒pMD18-T-RchIFN-γ中扩增到目的基因成熟肽基因编码序列,大小为438bp。将贵妃鸡IFN-γ基因成熟肽编码序列亚克隆到毕赤酵母表达载体的EcoR Ⅰ和Not Ⅰ位点,获得融合表达载体pPIC9K-RchIMFN-Ⅰ,使贵妃鸡IFN-γ成熟肽基因编码序列与载体上的α-factor信号肽序列构成一个完整的表达阅读框,结果表明,已经成功构建了贵妃鸡IFN-γ基因的毕赤酵母表达载体pPIC9K-RchOIFN-γ,为进一步研究贵妃鸡γ干扰素的结构和功能以及重组γ干扰素在养殖业中的应用奠定了基础。