贵妃鸡、番鸭γ干扰素基因的克隆及毕赤酵母表达载体的构建

来源 :广东海洋大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:li1977323
下载到本地 , 更方便阅读
声明 : 本文档内容版权归属内容提供方 , 如果您对本文有版权争议 , 可与客服联系进行内容授权或下架
论文部分内容阅读
γ干扰素是一种由T淋巴细胞在促有丝分裂源和抗原刺激下产生的细胞因子,它具有高效抗病毒和免疫调节作用,有广阔的应用前景。 本研究根据Genbank中禽γ干扰素(interferon-γ)基因cDNA序列设计简并引物,采用RT-PCR的方法成功的从贵妃鸡和番鸭脾淋巴细胞中扩增到IFN-γ基因cDNA片段,并将其克隆到pMD18-T载体中进行序列测定,结果表明:两种禽IFN-γ基因cDNA长度均为495bp,编码164个氨基酸和一个终止密码子。它们与Genbank中红原鸡和绿头鸭IFN-γ基因cDNA核苷酸序列同源性分别为99.8%和98.0%,与Genbank其它6个物种(人、鼠、猪、马、牛和犬)的cDNA序列进行比较,发现核苷酸序列同源性在49%~84%之间,氨基酸序列同源性在25%~81%之间,说明不同物种之间IFN-γ基因差异较大。 根据贵妃鸡IFN-γ基因测序结果设计另一对引物,用PCR方法从含有贵妃鸡IFN-γ基因的重组质粒pMD18-T-RchIFN-γ中扩增到目的基因成熟肽基因编码序列,大小为438bp。将贵妃鸡IFN-γ基因成熟肽编码序列亚克隆到毕赤酵母表达载体的EcoR Ⅰ和Not Ⅰ位点,获得融合表达载体pPIC9K-RchIMFN-Ⅰ,使贵妃鸡IFN-γ成熟肽基因编码序列与载体上的α-factor信号肽序列构成一个完整的表达阅读框,结果表明,已经成功构建了贵妃鸡IFN-γ基因的毕赤酵母表达载体pPIC9K-RchOIFN-γ,为进一步研究贵妃鸡γ干扰素的结构和功能以及重组γ干扰素在养殖业中的应用奠定了基础。
其他文献
北京市1991一1992年度优秀新闻工作者名单马风文方学深王文斌王文娴王占柱王志权王林王坤生王炳辉王振业王慧明白继良龙长万乔玉成乔建华刘陈德刘景波关威李宝珠李亚非李振英
为了更系统地分析禽流感病毒致病力的分子基础,摸清其遗传变异规律,本研究通过大规模的禽流感序列比对分析,生物信息学分析,有如下发现: 1、本研究对NS1的C末端PDZ结合区域的最
粉末冶金技术是目前世界上较先进的冶金技术之一,它已被应用在国民经济的各部门。一般的金属加工有大量的金属屑消耗,对于一些贵重的稀有金属来说(例如钛、镍、钴和铬等),大
一、问题的提出糖用甜菜是我国制糖工业主要原料之一。近年来我国甜菜播种面积居世界第2位。但是,我国甜菜总产量和粗糖产量仅居世界第8位和第13位。单位面积产糖量在世界20
日前,中央电视台副台长洪民生向记者宣布:由中央电视台组办的,旨在呼唤更多电视艺术精品的首届中国电视节目观摩展播、“CCTV”杯优秀节目评选经过两轮角逐,结果已明。全国1
本论文综述了反刍动物饲料评价体系的发展,系统介绍了美国康奈尔大学提出的净碳水化合物.蛋白质体系(Comell Net Carbohydrate and Protein System,CNCPS),通过与美国国家科学研
我矿地质情况复杂,近几年来,“三级矿量”不足,我们加强了对水平钻的管理,加快了钻探速度,探明了矿体赋存情况,获得了一定经济效益。 一、我矿使用水平钻的经过 我矿三一五标
杜仲是我国特产的著名药材,有近千年的栽培历史。以树皮及叶入药,有补肝肾、强筋骨、治腰部疼痛、足膝痿弱、小便余沥、阴下湿痒、胎漏欲堕、高血压。由于杜仲药用价值很高,
波兰采煤综合机械化的研究、发展已经有27个年头。前20年发展速度非常慢,而后7年则发生了显著变化。五十年代中期波兰就开始研究液压支架,1960年综采程度还是零,1970年为3.6
采用优化SDS法,成功地提取适合作分子生物学研究的狗牙根总DNA,建立了狗牙根RAPD反应优化体系。对100个Operon公司的随机引物进行了多态性筛选,10个引物的扩增结果被用于RAPD分