目的角膜损伤引起的角膜盲是我国主要的致盲性眼病之一。对于严重的角膜损伤,角膜移植是目前最主要的治疗手段,但角膜供体匮乏和术后免疫排斥限制了移植手术的开展。干细胞治疗的不断发展为角膜损伤治疗提供了新思路,其中脂肪干细胞作为一种获取简便的种子细胞,被发现对损伤角膜有修复作用,可能涉及到干细胞旁分泌外泌体过程,其影响和作用机制如何,以及如何提高使用便捷性扩大应用,有待深入研究。本研究拟探讨脂肪干细胞在修复角膜主要组成部分角膜基质损伤中的作用,并对其修复的机制进行初步研究,分析脂肪干细胞外泌体在其中的作用。同时尝试角膜内皮修复的初步研究。方法首先取新西兰大白兔腹股沟脂肪组织分离出脂肪干细胞进行培养,评价其多向分化能力,并评估CD90纯化分选对细胞干性的作用。取新西兰大白兔角膜基质层组织分离角膜基质细胞,行CCK-8检测角膜基质细胞增殖情况,流式细胞术检测细胞凋亡,western blot检测细胞金属蛋白酶(MMPs)和胶原相关蛋白水平,从而评估在体外共培养中脂肪干细胞对角膜基质细胞的影响提取脂肪干细胞外泌体,采用纳米颗粒跟踪分析技术(NTA)显示外泌体纳米颗粒直径,流式细胞术和蛋白质印迹证实CD9,CD81,flotillin-1和HSP70等标记物在提取颗粒上的表达,检测外泌体纯度。将外泌体与角膜基质细胞共培养,使用CCK-8测定,Annexin V-FITC/PI测定,western blot和形态学特征评估外泌体对角膜基质细胞的影响。尝试使用化学缺氧法检测用不同浓度的CoC12(0、50、100、150、200、400μm/L)培养12h、24h、48h、72h后对脂肪干细胞增殖能力的影响,选取合适浓度值处理,并加入不同BMP4与VEGF浓度梯度联合培养诱导脂肪干细胞,观察结果。结果从兔腹股沟分离培养的脂肪干细胞具有多向分化的干细胞能力。通过对干细胞表面免疫标记的识别,经流式分选的CD90+细胞比未分选细胞有着更强的细胞增殖能力,表面抗体表达增强,比CD90-ADSCs和未分选的ADSCs具有更强的成骨和成软骨分化能力,干细胞特性增强。兔脂肪干细胞与角膜基质细胞共培养能促进角膜基质细胞增殖、抑制其凋亡,维持角膜基质透明度;Ⅰ型、Ⅱ型、Ⅲ型、Ⅳ型和Ⅳ型胶原蛋白、Fibronectin蛋白的表达上调,MMP1、MMP2、MMP3蛋白表达抑制,促进细胞外基质的合成。提取了脂肪干细胞外泌体并验证。脂肪来源外泌体处理促进了角膜基质细胞的增殖并抑制其凋亡,MMPs被下调、合成减少,角膜基质细胞中胶原纤维被上调、合成增加。50μmol/L CoCl2在作用时间为12-48h时对脂肪干细胞增殖能力无影响,经BMP4与VEGF联合诱导后仅观察到有少量类似内皮细胞多边形态的细胞结构。结论脂肪干细胞显著促进角膜基质细胞的生长和转移,间接共培养脂肪干细胞和角膜基质细胞过程中旁分泌功能起到了重要的作用。脂肪干细胞来源外泌体积极参与了角膜基质细胞胞外基质的合成,促进其增殖并抑制其凋亡,与干细胞本身的角膜基质修复作用类似。外泌体在临床应用上比干细胞直接应用存在优势,更稳定、便于运输及应用效能高,临床角膜基质损伤的患者可能从本研究及后续的进一步研究成果中受益。