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背景白血病髓外浸润是白血病常见临床表现,通过对白血病死亡患者的尸检,发现50%以上的患者消化系统与泌尿系统发生白血病浸润,呼吸、神经、生殖系统也多发浸润,并且认为病程的长短、复发次数与浸润的发生有关。在单纯骨髓复发(BMR)尚未出现时,单纯髓外复发(EMR)易被忽视,而EMR在CR患者中发生的比例为5%-20%,并且可由全身多个系统如神经、皮肤、肝、脾、消化道、眼底等复发,EMR距完全缓解平均9个月,EMR后50-90天发现BMR。mi RNA参与了多种实体肿瘤转移的过程,但其在白血病转移中的作用仍是未知的。而白血病的髓外浸润又是与患者的复发与生存期息息相关的,故mi RNA与白血病髓外浸润的关系与其中的分子机制是值得探索的。目的通过mi RNA-29c/b2敲除小鼠AML髓外浸润发生的观察,证明mi RNA-29c/b2对AML髓外浸润的调控。从而,进一步验证了在AML髓外浸润的过程中mi RNA的重要作用与意义。方法1、mi RNA-29c/b2对AML细胞生物学功能调控的观察使用si RNA降低白血病细胞株中的mi R-29c/b2的表达,并通过白血病细胞与基质细胞的黏附实验,以及白血病细胞自身的转移、侵袭相关实验,观察基因敲除组白血病细胞的黏附下转移能力是否发生改变,以明确mi RNA-29c/b2对白血病细胞迁移及黏附能力的调控。2、mi R-29c/b2对小鼠髓外浸润调控的观察使用CRISPR/Cas9技术全身敲除mi RNA-29c/b2的C57小鼠,使用由FBL-3细胞系分泌的Friend Virus反转录病毒接种于小鼠,诱导小鼠骨髓中正常造血干细胞发生改变,使其自发红白血病。通过观察小鼠发病时的外周血血象变化下外周血中白血病细胞的比例,并观察发病小鼠的生存期下髓外器官大体观,制作生存曲线;并观察HE染色及肿瘤标记物标记后的髓外器官镜下浸润程度,比较两组小鼠生存期下髓外浸润的差异,以明确mi R-29c/b2对小鼠髓外浸润的调控。3、髓外器官中mi RNA-29c/b2改变对AML髓外浸润调控的观察将慢病毒转染后,稳定表达GFP的野生组FBL-3红白血病细胞株接种于KO组与WT组小鼠,致使小鼠继发红白血病。通过比较两组小鼠发病的生存率、髓外器官中GFP阳性细胞的数量、外周血中GFP阳性肿瘤细胞的占比,观察在肿瘤细胞基因组不变的继发白血病中,髓外器官微环境改变对白血病浸润下预后的影响,以明确髓外器官中mi RNA-29c/b2的改变对AML髓外浸润的调控。结果1、经黏附实验下迁移实验结果,采用荧光显微镜拍照示AML细胞中的mi R-29c/b2的调控了肿瘤细胞的黏附下迁移能力。2、采用小鼠自发红白血病模型,经过观察结果示KO组骨髓原始细胞多于WT组,KO组原始细胞转移能力弱于WT组,KO组原始细胞在髓外器官的浸润能力弱于WT组。表明mi R-29c/b2的缺失与白血病髓外浸润有关,并且明显影响了白血病小鼠的生存。3、采用小鼠继发红白血病模型,经过观察结果示髓外器官的mi R-29c/b2的缺失所导致的微环境改变,与白血病髓外浸润无关。结论1、mi RNA-29c/b2调控了AML细胞的黏附与迁移。2、通过小鼠自发白血病模型可以证明全身mi RNA-29c/b2敲除小鼠髓外浸润少于野生组小鼠。3、通过小鼠继发白血病模型可以证明髓外器官的mi RNA-29c/b2的缺失对AML髓外浸润无影响。