CXJZ菌株分泌β-甘露聚糖酶的分离纯化及其酶学性质研究

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本文通过超滤浓缩、硫酸铵沉淀、丙酮沉淀及Sephadex G-100凝胶层析等方法,将CXJZ菌株β-甘露聚糖酶进行了分离、纯化,并对β-甘露聚糖酶的酶学性质进行了研究,为β-甘露聚糖酶的工业化生产和应用提供了科学依据。通过实验得出以下结论:从CXJZ菌株分离β-甘露聚糖酶最佳碳源为甘露糖,但考虑到成本,最终培养基确定为:以葡萄糖为碳源,取样点在7.5h。最佳分离条件为:100kD-10kD超滤浓缩、45%-70%硫酸铵沉淀、1.2:1-1.8:1(V/V)丙酮沉淀及Sephadex G-100凝胶层析,其纯化倍数为12.05,收率为33.50%。通过SDS-PAGE得到分子量为52.29kD的单一条带。该酶的作用pH范围是4.6-7.6,最适pH为6.4,稳定pH范围是4.6-7.0。该酶的稳定温度范围在55℃以下,酶的作用温度范围是35-55℃,最适温度为50℃,在70℃条件下不稳定。Mg2+、Ca2+和K+ 对β-甘露聚糖酶有激活作用,而Co2+、Hg2+、Mn2+、Ag+则对β-甘露聚糖酶具有强烈的抑制作用。该酶的动力学常数,槐豆胶:Km为1.75mg/L,Vmax为2500μmol/(min? ml);魔芋粉:Km为1.57mg/L,Vmax为1430μmol/(min? ml)。通过对β-甘露聚糖酶的化学修饰研究发现:巯基、酪氨酸残基、色氨酸残基在维持β-甘露聚糖酶活性方面具有重要的作用。
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