EP2和FP受体激动剂对奶牛子宫内膜上皮细胞中转化生长因子β1和血管内皮生长因子表达的影响

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目的:旨在揭示抗炎类药物------吲哚美辛(Indomethacin)对奶牛子宫内膜上皮细胞中转化生长因子β1(Transforming Growth Factor β1,TGFβ1)和血管内皮生长因子(Vascular Endothelial Growth Factor, VEGF) mRNA表达的影响;以及吲哚美辛处理后,EP2受体激动剂(Butaprost)和FP受体激动剂(Fluprostenol)对奶牛子宫内膜上皮细胞中TGFβ1和VEGFmRNA表达的调控机制,为临床治疗子宫内膜炎症反应以及在炎症治疗过程中对子宫内膜的修复与保护提供了理论指导,以其提高奶牛生殖系统疾病的治愈率。方法:(1)利用链蛋白酶消化法和机械法进行奶牛子宫内膜上皮细胞的原代分离并进行免疫荧光检测,而后将原代分离的细胞进行扩增培养到第4代并对扩增培养的细胞进行了MTT法增殖曲线的检测;(2)采用荧光定量PCR技术检测10-Smol/L吲哚美辛处理组以及吲哚美辛处理后的10-6mol/L Butaprost和10-6mol/L Fluprostenol处理组在不同作用时间(0h、2h、4h、8h、16h、24h和48 h)对奶牛子宫内膜上皮细胞中TGFβ1和VEGFmRNA表达的影响;(3)采用荧光定量PCR技术检测10-5mol/L吲哚美辛处理后,不同浓度的Butaprost (10-7~10-5mol/L)和Fluprostenol (10-7~10-5mol/L)对奶牛子宫内膜上皮细胞中TGFpβ1和VEGFmRNA表达的影响。(4)采用VWestern Blot检测10-5mol/L吲哚美辛处理组以及吲哚美辛处理后的106mol/L Butaprost和10-6mol/L Fluprostenol处理组对奶牛子宫内膜上皮细胞中TGFβ1蛋白和VEGF蛋白合成分泌的影响。结果:首先,通过链蛋白酶消化法和机械法成功的获得了奶牛子宫内膜上皮细胞,该细胞具有典型上皮细胞的形态,并具有与上皮细胞相似的增殖曲线,另外,原代分离的细胞能较高的表达子宫内膜上皮细胞的阳性标记蛋白:角蛋白。其次,荧光定量PCR技术检测结果显示,在10-5mol/L吲哚美辛处理后,奶牛子宫内膜上皮细胞中TGFβ1和VEGFmRNA表达均会产生不同程度的下降,其中TGFβ1mRNA的表达在吲哚美辛处理的4h,8h,16h和24h具有极显著降低(P<0.01),而VEGFmRNA的表达在处理的4h,8h和16h具有显著降低(P<0.01);而10-5mol/L吲哚美辛处理后再加入10-6mol/L Butaprost和10-6mol/L Fluprostenol,对奶牛子宫内膜上皮细胞中TGFβ1和VEGFmRNA表达均会产生不同程度的升高,其中相比于Butaprost, Fluprostenol对TGF-β1mRNA表达影响更强。第三,Butaprost和Fluprostenol均对TGF-β1和VEGFmRNA表达具有浓度依赖性,随着两者浓度的分别升高,TGF-β1和VEGFmRNA的表达水平逐渐升高。第四,WesternBlot检测结果显示,10-5mol/L吲哚美辛处理组和10-5mol/L吲哚美辛处理后再加入10-6mol/L Butaprost和10-6mol/L Fluprostenol的处理组中TGF-β1和VEGF蛋白表达量与荧光定量PCR技术检测的结果相类似。结论:1.吲哚美辛能够抑制子宫内膜上皮细胞中TGFβ1和VEGF的表达,提示内源性PGs上调TGFβ1和VEGF勺表达。2.EP2受体激动剂和FP受体激动剂均促进TGFβ1和VEG F的表达。3.EP2受体激动剂和FP受体激动剂对TGFβ1和VEGF mRNA表达具有一定的浓度依赖作用。
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