论文部分内容阅读
目的:探讨研究芒果苷对表达FLT3-ITD突变阳性AML细胞株MV4-11细胞和FLT3野生型AML细胞株THP-1细胞增殖、细胞周期、细胞凋亡以及FLT3基因mRNA表达水平和FLT3跨膜蛋白表达的影响,为将芒果苷开发为治疗白血病新型药物提供新的理论依据。方法:选择表达FLT3-ITD突变阳性的AML细胞株MV4-11和表达FLT3野生型的AML细胞株THP-1为研究对象,设PBS空白对照,用不同浓度芒果苷(0、0.25、0.5、0.75、1.00、1.25mmol/L)分别作用MV4-11、THP-1细胞,处理不同时间(12小时、24小时、48小时、72小时、96小时)。CCK-8方法测定芒果苷在不同浓度作用不同时间后细胞的增殖活性;根据CCK8实验结果计算细胞增殖半数抑制浓度(IC50),并筛选出芒果苷的最佳作用条件,并以该浓度和时间作为后续实验处理细胞的浓度和时间。用流式细胞术分别检测不同浓度芒果苷处理FLT3-ITD突变阳性的AML细胞株MV4-11和表达FLT3野生型THP-1细胞48h后细胞凋亡、细胞周期的影响;用流式细胞术检测芒果苷处理MV4-11和THP-1细胞48h后对FLT3跨膜蛋白表达水平的影响;用实时荧光定量聚合酶链反应(Real-time PCR)检测不同浓度芒果苷干预MV4-11和THP-1细胞48h后FLT3 mRNA的表达水平。结果:1.CCK-8检测不同浓度芒果苷对表达FLT3-ITD突变阳性AML细胞株MV4-11和FLT3野生型AML细胞株THP-1细胞增殖抑制率的影响,结果显示芒果苷可显著抑制MV4-11和THP-1细胞的增殖,且随着芒果苷作用浓度和作用时间的增加,对MV4-11和THP-1细胞增殖抑制作用越明显,具有浓度和时间依赖性。2.不同浓度芒果苷可诱导FLT3-ITD突变阳性AML细胞株MV4-11和FLT3野生型AML细胞株THP-1细胞发生早期凋亡,且随着芒果苷作用浓度增加,细胞凋亡越明显。3.流式细胞仪检测不同浓度芒果苷对FLT3-ITD突变阳性AML细胞株MV4-11和FLT3野生型AML细胞株THP-1细胞周期的影响,结果提示芒果苷可阻滞MV4-11和THP-1细胞周期在G0/G1至S期。4.实时荧光定量PCR检查不同浓度芒果苷对表达FLT3-ITD突变阳性AML细胞株MV4-11细胞和表达FLT3野生型AML细胞株THP-1细胞FLT3mRNA表达水平的影响。结果显示芒果苷能显著抑制MV4-11细胞和THP-1细胞FLT3mRNA的表达,且对表达FLT3野生型AML细胞THP-1抑制的更明显,MV4-11细胞和THP-1细胞芒果苷组与PBS对照组相比差异均有统计学意义(P<0.05)。5.流式细胞术检测IC50浓度芒果苷作用FLT3-ITD突变阳性的AML细胞株MV4-11和FLT3野生型AML细胞株THP-1 48h后,对MV4-11细胞和THP-1细胞FLT3跨膜蛋白表达的影响,结果显示MV4-11细胞和THP-1细胞的芒果苷组FLT3跨膜蛋白表达率与PBS对照组相比均有明显的下降,与PBS对照组相比差异均有统计学意义(P<0.05)。结论:1.芒果苷对表达FLT3-ITD突变阳性AML细胞株MV4-11和FLT3野生型AML细胞株THP-1的增殖均有明显的抑制作用,其抑制作用具有浓度-时间依赖性。2.芒果苷能诱导表达FLT3-ITD突变阳性AML细胞株MV4-11和FLT3野生型AML细胞株THP-1发生早期凋亡。3.芒果苷可导致表达FLT3-ITD突变阳性AML细胞株MV4-11和FLT3野生型AML细胞株THP-1细胞周期G0/G1期至S期的阻滞。4.芒果苷能抑制FLT3-ITD突变阳性AML细胞株MV4-11和FLT3野生型THP-1细胞FLT3mRNA和FLT3跨膜蛋白的表达。