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尼帕病毒性脑炎(Nipah virus Encephalitis,NiVE)是由尼帕病毒(Nipah virus,NiV)引起的一种新的烈性人兽共患传染病,也是国际上重要的生物武器研究对象及生物反 恐 防 范 对 象 。 NiV 为 副 粘 病 毒 科 ( Paramyxoviridae ) 副 粘 病 毒 亚 科(Paramyxovirinae)的 Henipavirus 属成员。融合蛋白 F 和受体结合蛋白 G 是 NiV的主要结构蛋白及免疫原。 本研究构建了分别表达 NiV 融合蛋白 F 和受体结合蛋白 G 的重组杆状病毒rBac-NF 和 rBac-NG。SDS-PAGE、Western-Blot 表明分子量分别为 61KD 和 66KD 左右的重组 F 蛋白(rNF)和 G 蛋白(rNG)在 rBac-NF 和 rBac-NG 感染的 sf9 昆虫细胞中获得表达,并具有特异免疫反应原性。以 rBac-NF 和 rBac-NG 感染的昆虫细胞裂解物稀释后直接包被 ELISA 板,检测兔抗灭活 NiV 全病毒高免血清中抗 F 蛋白、G蛋白特异抗体时,显示出高度敏感性和特异性。以 rBac-NF、rBac-NG 分别感染 sf9细胞和培养上清混合物为免疫原,按 250μl 剂量腹腔注射和 100μl 剂量肌肉注射免疫 BALB/c 小鼠。以 NiV F 蛋白和 G 蛋白囊膜嵌合水疱性口炎病毒(VSV)假病毒颗粒(表示为 VSV?G* GFP-NiV(F+G))替代 NiV 进行中和抗体检测,按病毒粒子感染率80%以上被抑制为判定标准,重组杆状病毒rBac-NF和rBac-NG表达蛋白rNF和 rNG 免疫小鼠诱导中和抗体滴度分别在 1:32 和 1:64 以上,rNG 免疫小鼠诱导中和抗体水平高于 rNF。结果表明,杆状病毒表达 rNF 和 rNG 具有替代 NiV 全病毒,作为非疫区安全、敏感和特异的诊断抗原的潜力;rNF 和 rNG 作为重组亚单位疫苗具有防制 NiVE 的应用潜力。 本研究进一步分别构建了表达 F 蛋白和 G 蛋白的重组 WR 株牛痘病毒 rVV-NF 和rVV-NG。SDS-PAGE、Western-Blot 证实,分子量分别为 61KD、66KD 左右的 F 蛋白和 G 蛋白分别在 rVV-NF 和 rVV-NG 感染的 Hela 细胞中获得表达。细胞融合试验结果显示 rVV-NF 和 rVV-NG 表达的重组 F 蛋白和 G 蛋白具有良好的生物学活性。为 NiV F蛋白和 G 蛋白结构与功能以及基因工程活载体疫苗的研究奠定了基础。 为探索 DNA 疫苗防制 NiVE 的有效性,本研究构建了表达 NiV 融合蛋白 F 和受体结合蛋白G的真核表达质粒pCAGG-NiV-F和pCAGG-NiV-G。两种质粒DNA分别按100μg剂量肌肉注射免疫 BALB/c 小鼠。两次加强免疫, 三周后以杆状病毒表达 F 蛋白、G蛋白为包被抗原,间接 ELISA 分别检测到免疫鼠血清产生显著的 NiV F 蛋白、G 蛋白特异抗体反应;同时,用 NiV F 蛋白、G 蛋白囊膜嵌合 VSV 假病毒颗粒 VSV?G* GFP-NiV(F+G)替代 NiV 进行中和抗体检测,按病毒粒子感染率 80%以上被抑制为判定标准,pCAGG-NiV-G DNA 免疫小鼠诱导中和抗体滴度(在 1:32 以上)高于pCAGG-NiV-F DNA 免疫小鼠诱导中和抗体滴度(在 1:2 以上)。研究结果证实 DNA 免