【摘 要】
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该实验采取抑制性差减杂交法（Suppression Subtractive Hybridization,SSH）构建差减杂交文库,各挑选1500个克隆构成正杂交库和反杂交库.然后随机挑选20个cDNA克隆测序,与基因数
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该实验采取抑制性差减杂交法（Suppression Subtractive Hybridization,SSH）构建差减杂交文库,各挑选1500个克隆构成正杂交库和反杂交库.然后随机挑选20个cDNA克隆测序,与基因数据库（GenBank）的EST库进行ELASTn同源性比对,从而分离获得与小麦苗期渗透胁迫有相关性的EST.差减文库滴度为2.7x10<8>cfu/ml,阳性克隆比例为75﹪,文库滴度较高,转化效率较高,适于进一步研究.测序比对结果表明：20条所测序列与BLASTn比较序列同源性大于90﹪,有3条直接与苗期抗旱cDNA文库公布的EST有同源性;5条分别与Em基因、ABA处理及水分胁迫表达序列有同源性;8条与其它逆境胁迫如热胁迫、冷胁迫、盐胁迫表达序列有同源性;其余4条未找到同源性很高的序列.通过同源性比对,可以发挥新的未知功能的EST,并了解有高度同源性的EST的来源.该文库所测序列平均长度为276bp左右,最长的800bp.从所测诸序列的片段长度及序列比对结果,可以得出该研究构建的SSH cDNA文库质量较好,可用于进一步研究.
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