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研究目的：天然来源的雷公藤红素对NF-κB具有显著的抑制作用,并且表现出良好的抗肿瘤活性,但明显的毒副作用限制了其临床应用。HDAC抑制剂SAHA已被美国FDA批准上市,但其单药治疗实体瘤的疗效不佳,主要原因与其激活NF-κB通路相关。本论文第一部分旨在研究雷公藤红素与SAHA的协同抗肿瘤活性及其机制,在此过程中发现了雷公藤红素的抗肿瘤活性与E-cadherin相关。第一部分研究中还发现雷公藤红素具有调控E-cadherin的作用,鉴于E-cadherin参与了细胞上皮间质转化、粘附、转移等多个过程,因此第二部分旨在进一步考察雷公藤红素对E-cadherin的调控作用及其生物学效应。研究方法：一、(1)通过SRB法测定细胞存活率、克隆形成实验、凋亡的检测来评价联合用药的体外抗肿瘤活性；(2) Western blot和双荧光素酶检测系统考察NF-κB活性；(3)建立对SAHA耐药的SK-OV-3细胞株；(4) siRNA技术/质粒转染技术对E-cadherin基因进行特异性沉默/高表达,考察E-cadherin对雷公藤红素的抗肿瘤活性的影响；(5)建立人肺癌细胞95-D的裸鼠异种移植瘤模型,考察雷公藤红素和SAHA的体内抗肿瘤协同作用。二、(1)Western blot分析雷公藤红素对E-cadherin蛋白表达水平的影响；(2)siRNA对p38特异性沉默,考察p38对雷公藤红素调控E-cadherin作用的影响；(3)以TGF-p诱导EMT模型,观察细胞形态变化,采用Western blot分析雷公藤红素对上皮／间质标记物蛋白水平的影响,考察雷公藤红素对EMT的影响；(4)采用Western blot、RT-PCR及双荧光素酶报告系统检测雷公藤红素对SnaiL Slug的蛋白／转录表达水平以及Smad信号通路的影响；(5)采用细胞粘附实验、划痕修复实验及Transwell法分别评价雷公藤红素对细胞粘附、迁移及侵袭能力的影响；(6)采用B16-F10-GFP细胞C57BL/6小鼠实验性肺转移模型,检测雷公藤红素的体内抗肿瘤转移活性；(7)采用SRB法、PI染色法、Western blot法检测雷公藤红素与EGFR抑制剂的合用效果。研究结果：一、雷公藤红素和SAHA在多种肿瘤细胞上均表现出较强的协同抑制细胞增殖作用,同时两药合用能够显著增加Caspase介导的凋亡发生。雷公藤红素与SAHA合用能够显著抑制NF-κB活性,进而增强SAHA的抗肿瘤活性。然而雷公藤红素与SAHA的合用效果优于特异性NF-κB抑制剂与SAHA的合用效果,提示还有其他因素参与了两药合用的协同抗肿瘤作用。进一步实验结果发现雷公藤红素的抗肿瘤活性受到细胞内E-cadherin表达的影响,而雷公藤红素与SAHA联合用药能上调E-cadherin表达,这很可能是两药协同作用的另一机制。两药通过交互增敏的方式发挥协同抗肿瘤作用。在此基础上,在人肺癌细胞95-D的裸小鼠移植瘤模型上,雷公藤红素与SAHA合用能够增强对肿瘤生长的抑制作用,并且没有引起明显的毒副作用。二、雷公藤红素能够上调肿瘤细胞内E-cadherin表达,而这一调控作用依赖于它激活p38的作用。在TGF-β诱导的上皮间质转化(EMT)模型中,雷公藤红素能够抑制Smad信号通路,下调Slug/Snail的转录及蛋白表达水平,进而上调细胞内E-cadherin并干扰间质标记物表达,抑制EMT的发生。雷公藤红素能够通过靶向β1整合素通路抑制Fibronectin (FN)介导的细胞-ECM粘附,进而抑制肿瘤细胞的运动迁移及侵袭能力,而p38的激活参与其中。在体内模型中,雷公藤红素能够显著抑制B16-F10-GFP细胞形成肺转移。此外,EGFR抑制剂的抗肿瘤活性与细胞内E-cadherin表达相关,而雷公藤红素上调E-cadherin的作用使其能增强肿瘤细胞对EGFR抑制剂的敏感性。结论：(1)雷公藤红素与SAHA在体内外均表现出良好的协同抗肿瘤活性,能够协同诱导肿瘤细胞发生凋亡。雷公藤红素能够抑制NF-κB活性,以克服肿瘤细胞对SAHA的耐药,同时SAHA能够通过上调E-cadherin表达,增加肿瘤细胞对雷公藤红素的敏感性。两者通过互相增敏的方式达到协同抗肿瘤的效果。(2)雷公藤红素从肿瘤转移初始阶段(EMT)、粘附、迁移到形成转移灶多环节发挥抗转移作用。此外,雷公藤红素能够通过上调E-cadherin增强EGFR抑制剂的抗肿瘤活性。