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目的:酒精性肝病是长期大量饮酒所导致的肝损害,是西方国家最常见的肝病。随着我国经济水平的提高,本病发病率呈增高趋势。乙醇在机体代谢过程中产生大量的自由基与活性氧,导致脂质过氧化、蛋白质氧化、DNA损伤和加合物的形成,是酒精性肝病(alcoholic liver disease, ALD)的重要机制。一氧化氮合成酶(nitric oxide synthase, NOS)能够催化L-精氨酸和氧反应生成一氧化氮(nitric oxide, NO),NO是一种活跃因子,通过多种途径参与氧化应激反应,从而导致肝脏功能和形态的改变。有研究表明[1],具有细胞毒性、能加重酒精性肝损伤的NO主要来自诱导型一氧化氮合成酶(ind- ucible nitric oxide synthase, iNOS)的活化。浊毒学说是李佃贵教授在前人理论基础上,结合多年临床经验提出的新学说,认为浊毒是指内生之痰浊、瘀血、水湿等病理产物,日久对机体造成严重的损害。临床观察ALD以浊毒证较为多见。本实验旨在通过观察化浊解毒方对酒精性脂肪肝大鼠iNOS的抑制作用,并检测大鼠血清丙二醛(MDA)的含量和超氧化物歧化酶(SOD)的活性,探讨化浊解毒方对ALD的治疗作用及其可能的作用机制。方法:健康成年雄性SD大鼠40只,体重200～220克,随机分为5组,每组8只。分为正常组、模型组、凯西莱组、中药低剂量组、中药高剂量组。正常组每天早、晚1次生理盐水2ml灌胃,共12周;其它四组给予红星牌二锅头酒灌胃,早、晚1次,起始浓度为30%,酒精摄入量约为5g·kg-1·d-1,以后每周白酒浓度增加5%,酒精摄入量增加0.5 g·kg-1,浓度最高达50%,酒精摄入量达8 g·kg-1·d-1,8周后给予药物干预,每日中午1次灌胃。给药量分别为:凯西莱组50 mg·kg-1·d-1,中药低剂量组16.3 g·kg-1·d-1,中药高剂量组48.9 g·kg-1·d-1。实验12周末,测定血清丙氨酸转氨酶(alanineamino transferase, ALT)、天冬氨酸转氨酶(aspartate aminotransferase, AST)、碱性磷酸酶(alkali phosphatase, ALP)、γ-谷氨酞转肽酶(γ-glutamyltransferase,γ-GT)、甘油三酯(triglyeride, TG)、总胆固醇(cholesterol total, CHO),全部为酶法。分别用硫代巴比妥酸法(TAB法)和黄嘌呤氧化酶法测定肝组织丙二醛(MDA)的含量和超氧化物歧化酶(SOD)的活力,并通过HE染色观察肝组织的病理学改变,采用免疫组化SP法检测肝组织iNOS表达水平,并通过HPIAS-1000型图像分析仪进行图像分析处理得出平均吸光度值作为iNOS蛋白表达的相对含量。结果:1一般情况观察:实验结束时正常组大鼠毛色光滑,肥胖体重增加明显,反应灵敏;模型组大鼠毛色晦暗,反应迟钝,食欲不佳,大便稀溏,结膜充血,易激惹,体重下降;凯西莱组、中药低剂量组、中药高剂量组较模型组大鼠症状减轻;中药高剂量组大鼠一般情况改善要优于凯西莱组和中药低剂量组。2血清生化指标的检测结果:与正常组相比,模型组各血清生化学指标均有显著升高(ALT: 109.63±33.32 U/L vs 55.25±10.25 U/L, P<0.05; AST: 295.13±16.18 U/L vs 93.75±15.85 U/L, P<0.05; ALP: 230.13±33.04 U/L vs 99.57±29.31 U/L, P<0.05;γ-GT: 17.63±2.39 U/Lvs10.25±1.48 U/L, P<0.05; TG: 1.48±0.12 mmol/L vs 0.55±0.12 mmol/L, P<0.05;CHO: 2.04±0.34 mmol/L vs 1.19±0.23 mmol/L, P<0.05)。与模型组比较,凯西莱组除ALP之外,其它血清生化学指标均有显著降低(ALT: 72.37±14.46 U/Lvs109.63±33.32 U/L, P<0.05; AST: 240.75±14.63 U/Lvs295.13±16.18 U/L, P<0.05;γ-GT: 12.87±4.67 U/Lvs17.63±2.39 U/L, P<0.05; TG: 1.04±0.01 mmol/L vs 1.48±0.12 mmol/L, P<0.05;CHO: 1.74±0.14 mmol/L vs 2.04±0.34 mmol/L, P<0.05)。与模型组比较,中药低剂量组血清ALT、AST、ALP明显下降(ALT:88.12±11.05 U/L vs 109.63±33.32 U/L P<0.05; AST: 245.63±56.59 U/L vs 295.13±16.18 U/L, P<0.05; ALP: 191.50±34.69 U/L vs 230.13±33.04 U/L, P<0.05),其它指标下降,无统计学差异(P>0.05)。与模型组比较,中药高剂量组各血清生化学指标均有显著降低(ALT: 74.88±17.48 U/L vs 109.63±33.32 U/L, P<0.05; AST: 205.36±47.04 U/L vs 295.13±16.18 U/L, P<0.05; ALP: 159.14±18.95 U/Lvs230.13±33.04 U/L, P<0.05;γ-GT: 12.05±3.27 U/L vs 17.63±2.39 U/L, P<0.05; TG: 0.76±0.21 mmol/L vs 1.48±0.12 mmol/L, P<0.05; CHO: 1.34±0.35 mmol/L vs 2.04±0.34 mmol/L, P<0.05)。与中药低剂量组比较,除外AST、ALP,凯西莱组对其它血清生化学指标均有显著降低(ALT: 72.37±14.46U/L vs88.12±11.05 U/L, P<0.05;γ-GT: 12.87±4.67U/L vs 16.13±4.29 U/L, P<0.05; TG: 1.04±0.01mmol/Lvs 1.32±0.33 mmol/L, P<0.05;CHO: 1.74±0.14mmol/L vs 1.98±0.39 mmol/L, P<0.05)。与中药低剂量组比较,中药高剂量组血清生化学指标均有显著降低(ALT: 74.88±17.48U/L vs88.12±11.05 U/L, P<0.05; AST: 205.36±47.04U/L vs 245.63±56.59 U/L, P<0.05; ALP: 159.14±18.95 U/L vs 191.50±34.69 U/L, P<0.05;γ-GT: 12.05±3.27 mmol/L vs 16.13±4.29 mmol/L, P<0.05; TG: 0.76±0.21 mmol/L vs 1.32±0.33 mmol/L, P < 0.05; CHO: 1.34±0.35 mmol/L vs 1.98±0.39 mmol/L, P<0.05)。与凯西莱组比较,除外ALT、γ-GT,中药高剂量组对其它血清生化学指标均有显著降低(AST: 205.36±47.04 U/L vs 240.75±14.63 U/L, P < 0.05; ALP: 159.14±18.95 U/L vs 221.57±31.98U/L, P < 0.05; TG: 0.76±0.21 mmol/L vs 1.04±0.01 mmol/L, P < 0.05; CHO: 1.34±0.35 mmol/L vs 1.74±0.14 mmol/L, P<0.05)。3血清MDA含量、SOD活性的检测结果:与正常组比较,其它四组大鼠血清MDA含量均有不同程度升高(模型组:19.06±1.70 umol/L vs 7.18±1.37 umol/L, P<0.05;凯西莱组:10.35±2.32 umol/L vs 7.18±1.37 umol/L, P<0.05;中药低剂量组:13.06±1.45 umol/L vs 7.18±1.37 umol/L, P<0.05;中药高剂量组:10.73±1.01 umol/L vs 7.18±1.37 umol/L, P<0.0 1)。与模型组比较,各治疗组血清MDA含量均有下降(凯西莱组: 10.35±2.32 umol/L vs 19.06±1.70 umol/L , P<0.05;中药低剂量组: 13.06±1.45 umol/L vs 19.06±1.70 umol/L, P<0.05;中药高剂量组:10.73±1.01 umol/L vs 19.06±1.70 umol/L, P<0.05)。与中药低剂量组比较,中药高剂量组、凯西莱组血清MDA含量相对较低(凯西莱组: 10.35±2.32 umol/L vs 13.06±1.45 umol/L , P<0.05;中药高剂量组: 10.73±1.01 umol/L vs 13.06±1.45 umol/L, P<0.05);中药高剂量组、凯西莱组两者之间比较P>0.05。与正常组比较,其它四组大鼠血清SOD活性均有降低(模型组: 117.23±10.16 U/ml vs 186.15±9.92 U/ml, P<0.05;凯西莱组:137.38±14.94 U/ml vs 186.15±9.92 U/ml, P<0.05;中药低剂量组:131.88±10.21 U/ml vs 186.15±9.92 U/ml, P<0.05;中药高剂量组:153.83±15.27 U/ml vs 186.15±9.92 U/ml, P<0.05)。与模型组比较,各治疗组血清SOD活性均高于模型组(凯西莱组:137.38±14.94 U/ml vs 117.23±10.16 U/ml, P<0.05;中药低剂量组:131.88±10.21 U/ml vs 117.23±10.16 U/ml, P<0.05;中药高剂量组:153.83±15.27 U/ml vs 117.23±10.16 U/ml, P<0.05)。与中药高剂量组比较,凯西莱组中药低剂量组SOD活性减低明显(凯西莱组:137.38±14.94 U/ml vs 153.83±15.27 U/ml, P<0.05;中药低剂量组:131.88±10.21 U/ml vs 153.83±15.27 U/ml, P<0.05);中药低剂量组、凯西莱组两者比较P>0.05,无统计学意义。4肝组织病理学检测结果:正常组肝组织结构完整、清晰,肝小叶结构正常,肝细胞索排列规则,肝细胞间连接紧密,中央静脉大而壁薄,在中央静脉周围呈放射状分布,细胞呈多形;模型组肝脏小叶结构消失,中度脂肪变,肝细胞变大,肿胀,大小不均,胞浆内脂滴大小不一,以小泡性脂肪滴为主,细胞核在中央,肝窦略狭窄,病变以中央静脉周围最为明显,伴炎细胞浸润和轻度的肝细胞水样变性及散在点状坏死灶;中药低剂量组、凯西莱组较模型组,肝脏脂肪变性减轻,出现局限性轻度脂肪变,肝内炎细胞浸润、肝细胞坏死程度明显减轻;中药高剂量组肝小叶结构正常清晰,肝细胞索排列规则,局限性细胞轻度脂肪变,偶见炎细胞浸润,未见肝细胞坏死灶。5肝组织iNOS表达的检测结果:正常组无iNOS表达,模型组iNOS的平均吸光度值在造模第12周明显增加(53.30±10.03,P<0.05),中药低剂量组、中药高剂量组、凯西莱组的平均吸光度值均有不同升高,分别为39.54±5.30, 28.52±7.90, 23.70±2.93 (P<0.05)。中药低剂量组、凯西莱组的平均吸光度值较中药高剂量组增加明显(P<0.05),中药低剂量组、凯西莱组平均吸光度值之间比较无统计学差异(P>0.05)。结论:1化浊解毒方能够显著改善ALD大鼠血清生化学指标及病理组织学改变,对ALD确具有显著治疗作用,其中以高剂量治疗组效果最佳,且优于凯西莱组。2化浊解毒方治疗ALD的作用机制与其降低血清MDA含量,提高SOD活性,抑制肝组织iNOS表达等因素有关。3本实验表明,浊毒内蕴是中医学在ALD的重要病理机制之一。