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目的:探讨电压门控式钾离子通道在卵巢上皮性癌细胞株SKOV3、3AO及A2780中的表达状态。方法:采用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测电压门控式钾离子通道Kv1.1及Kv1.3基因的表达;应用免疫细胞化学方法检测电压门控式钾离子通道Kv1.1及Kv1.3通道蛋白在SKOV3、3AO及A2780细胞上的表达。结果:卵巢上皮性癌细胞株SKOV3、3AO及A2780三种细胞均表达Kv1.1及Kv1.3钾离子通道基因。Kv1.1扩增片断长度为380bp,Kv1.3扩增片断长度为382bp。且发现SKOV3细胞Kv1.1mRNA与GAPDHmRNA光密度比值为0.90±0.06;3AO细胞Kv1.1mRNA与GAPDHmRNA光密度比值为0.92±0.04;A2780细胞Kv1.1mRNA与GAPDHmRNA光密度比值为0.93±0.02;比较三种细胞Kv1.1mRNA的表达量差异无显著性(P>0.05)。SKOV3、3AO及A2780细胞Kv1.3mRNA与GAPDHmRNA的光密度比值分别为1.23±0.04、1.22±0.06及1.20±0.03,三种细胞株Kv1.3mRNA的表达量比较也无明显差异(P>0.05)。免疫细胞化学染色发现,SKOV3、3AO及A2780细胞Kv1.1及Kv1.3抗原染色均为阳性,三种细胞质膜呈现棕黄色,提示电压门控式钾离子通道Kv1.1及Kv1.3蛋白表达在SKOV3、3AO及A2780细胞膜上。结论:卵巢上皮性癌细胞株表达电压门控式钾离子通道,且其表达量在不同的卵巢上皮性癌细胞株中无明显差异。目的:探讨电压门控式钾离子通道改变对卵巢上皮性癌细胞株SKOV3、3AO及A2780细胞增殖及细胞周期的影响。方法:采用四甲基偶氮唑蓝(MTT)法,检测不同浓度及类型钾离子通道阻滞剂阻断卵巢上皮性癌细胞上钾离子通道后,卵巢上皮性癌细胞增殖活性的改变;应用流式细胞仪技术检测不同浓度及类型钾离子通道阻滞剂对卵巢上皮性癌细胞周期转换的影响。结果:一、不同类型钾离子通道阻滞剂对卵巢上皮性癌细胞株增殖活性的影响1.4-氨基吡啶为电压门控式钾离子通道特异性阻滞剂。MTT检测发现不同浓度的4-氨基吡啶作用SKOV3、3AO及A2780细胞48小时后,可以明显抑制三种细胞的增殖活性。1、5、10mmol/L的4-氨基吡啶对SKOV3细胞的抑制率分别为35.09%、54.65%及69.13%,与对照组相比差异有显著性(P<0.01);1、5、10mmol/L的4-氨基吡啶对3AO细胞的抑制率分别为41.43%、61.94%及70.93%,与对照组相比差异有显著性(P<0.01);1、5、10mmol/L的4-氨基吡啶对A2780细胞的抑制率分别为72.41%、94.60%及95.34%,与对照组相比差异有显著性(P<0.01);4-氨基吡啶对A2780细胞增殖的抑制作用较SKOV3、3AO细胞明显(P<0.05)。2.北非蝎毒素为钙离子敏感性钾离子通道特异性阻滞剂。MTT检测发现不同浓度的北非蝎毒素作用SKOV3、3AO及A2780细胞48小时后,对三种细胞的增殖活性无明显影响。5、10、15nmol/L北非蝎毒素对SKOV3细胞的抑制率分别为2.64%、2.95%及4.01%,与对照组相比差异无显著性(P>0.05);5、10、15nmol/L北非蝎毒素对3AO细胞的抑制率分别为2.11%、2.64%及3.48%,与对照组相比差异无显著性(P>0.05);5、10、15nmol/L北非蝎毒素对A2780细胞的抑制率分别为2.85%、3.17%及3.91%,与对照组相比差异无显著性(P>0.05)。3.格列本脲为ATP敏感性钾离子通道特异性阻滞剂。MTT检测发现不同浓度的格列本脲作用SKOV3、3AO及A2780细胞48小时后,对三种细胞的增殖活性无明显影响。50、100、1501xmol/L的格列本脲对SKOV3细胞的抑制率分别为3.06%、3.91%及5.49%,与对照组相比差异无显著性(P>0.05);50、100、150μmol/L格列本脲对3AO细胞的抑制率分别为3.27%、3.38%及4.01%,与对照组相比差异无显著性(P>0.05);50、100、150μmol/L格列本脲对A2780细胞的抑制率分别为3.32%、3.40%及3.13%,与对照组相比差异无显著性(P>0.05)。4.将4-氨基吡啶、北非蝎毒素、格列本脲三种不同类型的钾离子通道阻滞剂对SKOV3、3AO及A2780三种细胞增殖的抑制率相比较,4-氨基吡啶对三种细胞增殖的抑制与北非蝎毒素及格列本脲比较差异有显著性(P<0.05);北非蝎毒素及格列本脲比较差异无显著性(P<0.05)。二、不同类型钾离子通道阻滞剂对卵巢上皮性癌细胞株周期的影响1.流式细胞仪检测发现不同浓度的4-氨基吡啶作用SKOV3、3AO及A2780细胞72小时后,细胞周期的G0/G1、S、G2/M期细胞分布均发生变化,细胞周期停滞在G0/G1期。1、5、10mmol/L的4-氨基吡啶作用于SKOV3细胞后,细胞周期的G0/G1期细胞数由39.68%分别增加到53.28%、62.31%及78.08%,S期细胞数由57.29%分别减少到45.37%、36.25%及20.19%,G2/M期细胞数由3.02%分别减少到1.34%、1.43%及1.72%各浓度组与对照组相比差异有显著性(P<0.05);1、5、10mmol/L的4-氨基吡啶作用于3AO细胞后,G0/G1期细胞数由39.68%分别增加到58.24%、66.35%及78.13%,S期细胞数由57.29%分别减少到39.45%、32.44%及20.68%,G2/M期细胞数由3.02%分别减少到2.31%、1.21%及1.19%,各浓度组与对照组相比差异有显著性(P<0.05);1、5、10mmol/L的4-氨基吡啶作用于A2780细胞后,G0/G1期细胞数由39.68%分别增加到61.27%、78.08%及81.21%,S期细胞数由57.29%分别减少到37.17%、20.19%及17.26%,G2/M期细胞数由3.02%分别减少到1.56%、1.72%及1.53%,各浓度组与对照组相比差异有显著性(P<0.05);4-氨基吡啶对三种细胞的周期转换影响比较无明显差异(P>0.05)。2.应用不同浓度的北非蝎毒素作用SKOV3、3AO及A2780细胞72小时后,细胞周期的G0/G1、S、G2/M期细胞分布无明显变化。5、10、15 nmol/L的北非蝎毒素作用SKOV3细胞后,G0/G1期细胞数由39.68%分别改变为39.23%、38.98%及39.36%,S期细胞数由57.29%分别改变为58.22%、59.59%及58.27%,G2/M期细胞数由3.02%分别改变为2.54%、1.42%及2.36%,各浓度组与对照组相比差异无显著性(P>0.05);5、10、15nmol/L的北非蝎毒素作用3AO细胞后,G0/G1期细胞数由39.68%分别改变为40.12%、41.23%及42.24%,S期细胞数由57.29%分别改变为56.85%、55.80%及54.89%,G2/M期细胞数由3.02%分别改变为3.03%、2.97%及2.86%,各浓度组与对照组相比差异无显著性(P>0.05);5、1 0、15nmol/L的北非蝎毒素作用A2780细胞后,G0/G1期细胞数由39.68%分别改变为38.35%、38.04%及39.21%,S期细胞数由57.29%分别改变为57.96%、58.23%及58.10%,G2/M期细胞数由3.02%分别改变为3.68%,3.73%及2.68%,各浓度组与对照组相比差异无显著性(P>0.05)。3.应用不同浓度的格列本脲作用SKOV3、3AO及A2780细胞72小时后,细胞周期的G0/G1、S、G2/M期细胞分布也无明显变化。50、100、150μmol/L的格列本脲作用SKOV3细胞后,G0/G1期细胞数由39.68%分别改变为38.87%、39.12%及39.36%,S期细胞数由57.29%分别改变为57.65%、58.25%及58.45%,G2/M期细胞数由3.02%分别改变为3.47%、2.62%及2.18%,各浓度组与对照组相比差异无显著性(P>0.05);50、100、150μmol/L的格列本脲作用3AO细胞后,G0/G1期细胞数由39.68%分别改变为39.58%、39.69%及41.25%,S期细胞数由57.29%分别改变为57.37%、57.38%及56.77%,G2/M期细胞数由3.02%分别改变为3.05%、2.93%及1.98%,各浓度组与对照组相比差异无显著性(P>0.05);50、100、150μmol/L的格列本脲作用A2780细胞后,G0/G1期细胞数由39.68%分别改变为39.92%、40.02%及40.63%,S期细胞数由57.29%分别改变为56.81%、56.33%及57.12%,G2/M期细胞数由3.02%分别改变为3.26%、3.65%及2.24%,各浓度组与对照组相比差异无显著性(P>0.05)。4.将4-氨基吡啶、北非蝎毒素、格列本脲三种不同类型的钾离子通道阻滞剂对SKOV3、3AO及A2780细胞周期转换的影响相比较,4-氨基吡啶与北非蝎毒素及格列本脲相比较,差异有显著性(P<0.05),北非蝎毒素及格列本脲比较差异无显著性(P>0.05)。结论:电压门控式钾离子通道阻滞剂对卵巢上皮性癌细胞系的增殖活性有抑制作用。电压门控式钾离子通道在卵巢上皮性癌细胞增殖及细胞周期转换起着重要作用;而钙离子敏感性钾离子通道及ATP敏感性钾离子通道对卵巢上皮性癌细胞株增殖、细胞周期转换无明显影响。