论文部分内容阅读
目的:既往研究认为,糖尿病肾病(DN)的主要病理特征是肾小球系膜基质增多、基底膜增厚,细胞外基质增多,随着病情渐进,发生肾小球硬化及肾间质纤维化。然而,这些病理变化只能解释30%~50%的尿蛋白的排泄,DN的发病机制仍未完全明确。近年来,很多研究表明,肾小球虑过膜最后一道屏障足细胞在DN发生发展中起重要作用。“榛花消肾安胶囊”是导师南征教授根据DN的病机关键“毒损肾络,邪伏膜原”理论而制定的临床常用有效方剂,在临床取得较好的疗效。本研究通过观察实验性DM大鼠肾脏氧化应激指标MDA、SOD、GSH-Px及足细胞相关蛋白WT1、podocin、podocalyxin及α3β1整合素表达的影响,探讨“榛花消肾安胶囊”对糖尿病大鼠肾脏足细胞损伤与氧化应激干预机制。方法:1 70只wistar雄性大鼠适应性喂养一周,随机分为正常对照组(10只)和造模组(60只),造模组腹腔注射1%STZ(50mg/kg)以制备实验性DM大鼠模型,72小时后,尾静脉采血,测空腹血糖≥16.7mmol/L者视为造模成功。将造模成功的51只大鼠随机分为DM模型组11只,榛花消肾安胶囊高、中、低剂量组,厄贝沙坦片组各10只。中药高、中、低剂量组分别以1g/kg/d,0.5g/kg/d,0.25g/kg/d,予榛花消肾安胶囊混悬液灌胃;阳性对照组予厄贝沙坦混悬液20mg/kg/d灌胃,连续灌胃观察12周。观察大鼠一般状态,记录24小时尿量,体重;实验结束时记录肾重/体重,检测空腹血糖、24h尿微量白蛋白;检测TC、TG,Scr、BUN。2应用光学显微镜和透射电镜观察肾组织病理形态学改变及足细胞改变,观察榛花消肾安胶囊对糖尿病大鼠肾脏病理形态学结构的影响。3检测肾组织丙二醛(MDA)含量,超氧化物歧化酶(SOD)活力,谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)活力。4采用免疫组化方法观察足细胞相关分子WT1、podocin、podocalyxin的蛋白表达;应用实时定量PCR检测podocin、podocalyxin、α3β1整合素m RNA表达。结果:1榛花消肾安胶囊能够改善实验性DM大鼠的一般状态及多饮、多食、多尿、消瘦的临床症状。2榛花消肾安胶囊能够降低实验性DM大鼠空腹血糖、TC、TG,改善糖脂代谢。3榛花消肾安胶囊对实验性DM大鼠早期肾脏体积增大有抑制作用,同时能够减少早期DN大鼠尿中蛋白的排出,降低BUN及Scr,改善肾功能。4榛花消肾安胶囊具有改善实验性DM大鼠肾脏组织病理形态,减轻肾小球基底膜增厚,细胞外基质的积聚,系膜区扩大,改善足细胞形态,从而减轻DM性肾小球硬化。5榛花消肾安胶囊能降低实验性DM大鼠肾脏MDA含量,增加SOD活力,GSH-Px活力,具有抗氧化应激作用。6榛花消肾安胶囊能够提高实验性DM大鼠的肾组织WT1、podocin、podocalyxin蛋白,增加podocin、podocalyxin、α3β1整合素m RNA的表达,具有保护肾小球足细胞作用。结论:榛花消肾安胶囊能够改善实验性DM大鼠一般状态以及多饮、多食、多尿、消瘦的症状;抑制早期肾脏肥大,减轻肾组织病理结构;降低空腹血糖、血脂,保护肾功,其作用机制考虑是榛花消肾安胶囊通过抗肾脏氧化应激,增加足细胞WT1、podocin、podocalyxin及α3β1整合素的表达而实现肾脏保护作用。导师南征教授认为,“毒损肾络,邪伏膜原”是消渴肾病的病机关键。本实验根据这一病机关键,应用“解毒通络,益肾达原”的治法与现代医学DN发病机制足细胞损伤与氧化应激相结合,通过抑制肾脏氧化应激及对肾小球滤过膜足细胞相关蛋白表达的提高而发挥治疗糖尿病肾病的作用。